一.器材
離心管,彎頭鑷子,離心機,移液器
二.步驟
1. 摘除眼球采血
(1)左手拇、食指抓取小鼠雙耳及頸后皮膚,小指固定尾部;
(2)中指將小鼠左側前肢輕壓在胸骨心臟部位,無名指按在腹部,捻動拇指,輕壓取血側眼部皮膚,使眼球充血突出;
(3)用彎頭鑷夾取眼球;
(4)根據需要捻動拇指與食指的方向,使血液從眼眶內以不同速度垂直流入離心管;
(5)同時用左手中指輕按小鼠心臟部位,以加快心臟泵血速度;
(6)當血液流盡時,用脫臼法處死小鼠。
2. 分離血清
(1)將離心管中的血置37℃溫箱或水浴1小時,也可室溫2小時;
(2)再置4℃冰箱內3~4小時或過夜;
(3)待血液凝固血塊收縮后,4000rpm離心10分鐘;
(4)取上清于干凈的離心管中,保存于-20℃,或加入防腐劑(0.01%硫柳汞或0.02%疊氮鈉),置4℃冰箱中保存?zhèn)溆谩?/span>
三.注意:
1. 采血前,可給小鼠喂點水;
2. 摘眼球采血取血量能達0.8~1.2ml,但老年和疾病小鼠血量會降低;
3. 采血場所有充足的光線;室溫夏季保持在25~28℃,冬季,15~20℃為宜;
4. 防止血液浸入眼部周圍毛發(fā),否則會造成污染和溶血;
5. 按壓心臟時,用力一定要適度,若用力過度,一是會造成動物采血中途死亡,使采血不完全,二是有可能引起溶血現象發(fā)生,影響實驗結果;
6. 采血用的器材和試管必須保持清潔干燥;
7. 采血時要防止小鼠掙扎,否則會損失比較多的血樣;
8. 血液凝固后不宜在4℃放置過久,否則會溶血。
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