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土壤多酚氧化酶（S-PPO）活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)（可見(jiàn)分光光度法）

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：粉劑×2 瓶，臨用前每瓶加入 15mL 蒸餾水，用不完的試劑 4℃保存；

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃保存；

試劑三：乙醚，4℃保存(自備)。

重鉻酸鉀標(biāo)準(zhǔn)液：液體 10mL×1 瓶，重鉻酸鉀溶液（2.55mmol/L），相當(dāng)于 0.1mg/mL 紫色沒(méi)食子素溶液。

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋：用 0.5mol/L HCL 溶液將標(biāo)準(zhǔn)液稀釋至 0.1、0.05、0.025、0.0125、0.00625、0.003125、0mg/mL。

產(chǎn)品說(shuō)明：

S-PPO 主要來(lái)源于土壤微生物、植物根系分泌物及動(dòng)植物殘?bào)w分解釋放，催化土壤中芳香族化合物氧化成醌，醌與土壤中蛋白質(zhì)、氨基酸、糖類、礦物等物質(zhì)反應(yīng)生成有機(jī)質(zhì)和色素，完成土壤芳香族化合物循環(huán)，用于土壤環(huán)境修復(fù)。

S-PPO 能夠催化鄰苯三酚產(chǎn)生紫色沒(méi)食子素，后者在 430nm 有特征光吸收。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、臺(tái)式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 比色皿、乙醚（不允許快遞）、冰和蒸餾水。

操作步驟：

1、可見(jiàn)分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 430nm，試劑三調(diào)零。

2、標(biāo)準(zhǔn)曲線的建立：取 1mL 稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)液于比色皿中在 430nm 處測(cè)定吸光值 A，根據(jù)吸光度（x） 和濃度（y，mg/mL）做出標(biāo)準(zhǔn)曲線。

3、樣本測(cè)定表

振蕩數(shù)次，室溫靜置 30min，取 1mL 上層液于 430nm 處測(cè)定吸光值 A。

S-PPO 活性計(jì)算：

根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線，將樣品吸光值 A（x）帶入公式中，計(jì)算出樣品濃度 y（mg/mL）。

單位的定義：每天每 g 土樣中產(chǎn)生 1mg 紫色沒(méi)食子素定義為一個(gè)酶活力單位。

S-PPO（U/g土樣）＝y(tǒng)×V提取相÷W÷T=840×y      

T：反應(yīng)時(shí)間，1h=1/24d；V 提取相：1.75mL；W：樣品質(zhì)量，0.05g。