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淀粉分支酶（SBE）試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-086

測定意義

SBE（EC 2.4.1.18）主要存在于植物中，是參與支鏈淀粉合成的關(guān)鍵酶，測定 SBE 活性在淀 粉生物合成、優(yōu)質(zhì)農(nóng)作物品種選育和品質(zhì)遺傳改良研究中具有重要意義。

測定原理

直鏈淀粉和碘結(jié)合后在 660nm 有特征光吸收，SBE 使直鏈淀粉含量減少，從而降低了淀粉- 碘復(fù)合物在 660nm吸收值 ，一定時(shí)間內(nèi)吸光度下降的百分率可以反映 SBE 活性。

需自備的的儀器和用品

可見分光光度計(jì)、水浴鍋、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、 1 mL 玻璃比色皿、研缽、冰、蒸 餾水

試劑的組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑一：液體 20mL×1 瓶 ，4℃保存；

試劑二：粉劑×2 支 ，4℃保存； 臨用前每支加入 1mL 蒸餾水，95℃沸水浴充分溶解后備用； 用不完的試劑 4℃保存；

試劑三：液體 25mL×1 瓶，4℃保存； 

試劑四：液體 5mL×1 瓶 ，4℃保存； 

粗酶液提取

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液）， 進(jìn)行冰浴勻漿。 15000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測。

測定步驟

混勻，37℃準(zhǔn)確保溫 20 min，95℃水浴 5min（蓋緊防止水分散失），冷卻

混勻，室溫靜置 10min，用蒸餾水調(diào)零，660nm 處讀取各管吸光值。

注意：

1 、可以在不同對照管中加入不同樣品的粗酶液，然后集中進(jìn)行 5min 95℃水浴處理。

2 、試劑二如有沉淀，務(wù)必沸水浴溶解后使用。 

SBE 活力單位的計(jì)算

1 、按照蛋白濃度計(jì)算

單位的定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 mg 蛋白在反應(yīng)體系中每降低 1% 碘藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE 活性(U/mg prot)=( A 對照管-A 測定管)/A 對照管÷Cpr ×100

2 、按照樣本鮮重計(jì)算

單位的定義：以波長 660nm 的吸光度下降百分率表示，每 g 組織在反應(yīng)體系中每降低 1％碘 藍(lán)值為一個(gè)酶活性單位。

SBE 活性(U/g  鮮重)=(A 對照管-A 測定管)/A 對照管÷(W÷V 樣總)×100

V 樣總：提取液總體積， 1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣品質(zhì)量，g。