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總皂苷含量測試盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-376

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

皂苷（Saponin）是苷元為三萜或螺旋甾烷類化合物的一類糖苷,主要分布于陸地高等植物中， 也少量存在于海星和海參等海洋生物中。許多中草藥如人參、遠志、桔梗、甘草、知母和柴胡等的主要有效成分都含有皂苷。皂苷還具有抗菌的活性或解熱、鎮(zhèn)靜、抗癌等生物活性。

測定原理：

使用超聲波提取樣品中的皂苷，利用香草醛-高氯酸顯色體系測定總皂苷含量。

所需的儀器和用品：

可見分光光度計、烘箱、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、高氯酸、乙酸、超聲清洗器

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50ml×1 瓶，4℃保存；

試劑一：12ml×1 瓶，4℃保存；

試劑二：高氯酸，自備；

試劑三：乙酸，自備。

總皂苷提?。?/span>

樣本烘干，粉碎過篩，稱取 0.05g，加入 1mL 提取液，超聲提取 1h；8000g，25℃離心 10min，取上清待測。

測定步驟：

1、可見分光光度計預熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 589nm，蒸餾水調(diào)零。

2、測定管：取0.5mL上清，70℃揮發(fā)至干。加入0.2mL試劑一和0.8mL試劑二，55℃水浴20min。吸取 200μL 加入 1mL 玻璃比色皿中，再加入 1000μL 試劑三，充分混勻后，589nm 下測定吸光度 A1。

3、空白管：取 0.5mL 提取液，70℃揮發(fā)至干。加入 0.2mL 試劑一和 0.8mL 試劑二，55℃水浴 20min。吸取 200μL 加入 1mL 玻璃比色皿中，再加入 1000μL 試劑三，充分混勻后，589nm 下測定吸光度 A2。計算△A= A1-A2。

總皂苷含量計算：

1、以齊墩果酸為對照品計算

標準狀態(tài)下的回歸曲線為：y = 0.0072x - 0.012，R² = 0.9968，x 為對照品濃度，μg/mL,y 為吸光度△A。

總皂苷含量(μg/g 干重)=（△A+0.012）÷ 0.0072×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)

=138.89×（△A+0.012）÷W

2、以人參皂苷 Re 為對照品計算

標準狀態(tài)下的回歸曲線為：y = 2.0466x - 0.0016，R² = 0.9983，x 為對照品濃度，mg/mL,y 為吸光度△A。

總皂苷含量(μg/g 干重)=（△A+0.0016）÷ 2.0466×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W)×1000

=488.62×（△A+0.0016）÷W

V 樣：加入樣本體積，0.5mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本干重，g；1000， 毫克到微克的換算系數(shù)。