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土壤脂肪酶（S-LPS）活性試劑盒說明書（可見分光光度法）

測定意義：

LPS 又稱甘油酯水解酶，催化甘油三酯水解生成脂肪酸和甘油（或者甘油二酯和單酯）。LPS 廣泛的存在于各種生物中。血清中 LPS 的異常增高常見于胰腺炎和胰腺癌。

測定原理：

LPS 催化油酯水解成脂肪酸，利用銅皂法測定脂肪酸生成速率，即可計(jì)算 LPS 活性。

自備儀器和用品：

研缽、臺式離心機(jī)、震蕩混勻器、可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、甲苯 100mL、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 90mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 14mL×1 瓶，4℃保存。 每次使用前用震蕩混勻器劇烈震蕩20min。

試劑三：甲苯 100mL×1 瓶，4℃保存（自備）。試劑四：液體 20mL×1 瓶，4℃保存。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 10μL×1 瓶，10 μmol/mL 的標(biāo)準(zhǔn)溶液，4℃保存。 臨用前加入3.168 mL 甲苯，充分溶解。

樣本處理：

建議稱取約 0.1g 土樣，加入 1mL 試劑一進(jìn)行冰浴勻漿，再用回旋式振蕩器振蕩提取 15min，4℃，4000g 離心 10min，取上清待測。

S-LPS 測定操作：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 710 nm，蒸餾水調(diào)零。
2、試劑一和試劑二置于 37℃水浴預(yù)熱 30min 以上。
3、在 5mL EP 管中依次加入下列試劑

37℃振蕩反應(yīng) 5 min 后，靜置 5min，取 800μL 上層液加入 1 mL 玻璃比色皿，于 710nm 處測定吸光值。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

S-LPS 活性計(jì)算公式：

活性單位定義：37℃中每克土樣每分鐘水解橄欖油生成 1μmol 脂肪酸為一個(gè)酶活單位。

S-LPS (μmol/min/g 土樣) = [C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]×V 反總÷（W×V 樣÷V 樣總）÷T

=16×[(A 測定管－A 空白管)÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管- A 空白管）]÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)品：10 μmol/mL；V 反總：反應(yīng)總體積，2mL；V 樣：反應(yīng)中加入樣本體積，0.125mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，10 min。