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測定意義：

GLS（EC 3.5.1.2）存在于高等動物和某些細菌以及植物根中，催化谷氨酰胺水解成谷氨酸和 氨，在氮素代謝中具有重要調(diào)控作用，尤其是調(diào)節(jié)游離氨含量和尿素代謝。

測定原理：

S-GLS 催化谷氨酰胺水解成 L-谷氨酸和氨，利用奈氏試劑檢測氨增加的速率，即可計算其 酶活性。

需自備儀器和用品：

臺式離心機、可見分光光度計、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽、 甲苯、冰和雙蒸 水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體×1 瓶，8 mL ，4  ℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，4  ℃保存；臨用前加入 25mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑 4℃ 保存；

試劑三：液體×1 瓶，30 mL ，常溫保存；

試劑四：液體×1 瓶，12 mL ，常溫保存；

試劑五：液體×1 瓶，8 mL ，常溫保存；

試劑六：液體×1瓶，6 mL ，常溫避光保存。

測定步驟：

1 、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 420nm ，蒸餾水調(diào)零。

2 、樣品測定（在 EP 管中加入下列試劑）：

混勻，37℃水浴 2  小時

混勻，8000 g ，25℃離心 10 min；取上清液，依次加入下列試劑

混勻，室溫靜置 15min ，420nm 處讀取測定管和對照管吸光值，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。對照管只要做一管。

注意：試劑六如出現(xiàn)沉淀，靜置后取上清使用。

酶活性計算：

標準條件下測定的回歸方程為 y = 3.8488x +0.0057；x 為標準品濃度(μmol/mL），y 為吸光 值 A。

單位定義：每 g 土樣每 min 催化谷氨酰胺生成 1nmol  氨定義為一個酶活力單位。

S-GLS（nmol/min/g  土樣）=(ΔA-0.0057)÷3.8488×V 反總÷W÷T × 1000

=2.27×(ΔA -0.0057)÷W。

V 反總：反應(yīng)體系總體積：1.05mL；T：反應(yīng)時間，2h= 120min；W：樣本質(zhì)量，g; 1000， μmol 到 nmol 換算系數(shù)。