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土壤亮氨酸氨基肽酶（S-LAP）活性試劑盒說明書（可見分光光度法）

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 65mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

產(chǎn)品說明:

S-LAP 是一類能水解肽鏈 N-末端為亮氨酸的酶，由土壤微生物分泌。S-LAP 活性變化與機(jī)體某些病理狀態(tài)密切相關(guān)。

S-LAP 分解 L-亮氨酰對硝基苯胺生成對硝基苯胺，后者在 405nm 有最大吸收峰，通過測定吸光值升高速率來計算 S-LAP 活性。

自備實驗用品及儀器：

可見分光光度計、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水

S-LAP測定步驟：

1、分光光度計或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 405nm，蒸餾水調(diào)零。

2、在試劑二瓶中加入 30mL 試劑一充分溶解（如較難溶解，可 60℃水浴加熱約 30min 促進(jìn)溶解）；在 37℃（哺乳動物）或 25℃（其它物種）水浴 10min 以上；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

3、操作表

混勻， 37℃振蕩反應(yīng) 1h 后，8000g 4℃離心 10min，取 1mL 上清液于比色皿中，405nm 處測定吸光值 A，計算ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管設(shè)一個對照管。

S-LAP 活力單位的計算：

單位的定義：每天每 g 土樣每天生成 1 μmol 對硝基苯胺定義為一個酶活力單位。

S-LAP（μmol/d /g 土樣）＝ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁶÷W÷T=14.8×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1.2×10^-3 L；ε：對硝基苯胺摩爾消光系數(shù)，9.72×10³ L / mol /cm； d：比色皿光徑，1cm；T：反應(yīng)時間，1h=1/24d； W：樣本質(zhì)量，0.2g。

注意事項：

當(dāng)?A 大于 1 時，建議將上清液稀釋后進(jìn)行測定；當(dāng)?A 小于 0.01 時，建議延長反應(yīng)時間。計算公式中注意乘以稀釋倍數(shù)或注意反應(yīng)時間變化。