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產(chǎn)品名稱:土壤植酸酶試劑盒

產(chǎn)品規(guī)格:50管/24樣,100管/48樣

產(chǎn)品貨號(hào):LE-1-048,LE-2-048

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貨號(hào)

產(chǎn)品名稱

檢測(cè)方法

規(guī)格

售價(jià)(元)

LE-1-048

土壤植酸酶測(cè)試盒

可見(jiàn)分光光度法

50/24

570

LE-2-048

土壤植酸酶測(cè)試盒

微量法

100管/48

990

土壤植酸酶(phytase)試劑盒說(shuō)明書(shū)(可見(jiàn)分光光度法

測(cè)定意義

植酸酶(phytase)是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸(鹽)的一類酶的總稱,屬磷酸單酯水解酶,它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷,降低糞便中的磷含量,減輕對(duì)環(huán)境的污染,改善營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用,因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。

測(cè)定原理

植酸酶在一定溫度和 pH 值條件下,水解底物植酸鈉生成無(wú)機(jī)磷與肌醇衍生物,無(wú)機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物,在 700nm 處有特征吸收峰,根據(jù) 700nm 處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋,甲苯(不允許快遞)。

試劑的組成和配制

緩沖液:液體 60mL×1 瓶,4℃保存。

試劑一:粉劑×1 瓶,4℃避光保存, 臨用前加緩沖液30mL 配制,現(xiàn)用現(xiàn)配;用不完的試劑4℃保存一個(gè)月。

試劑二:液體 30mL×1 瓶,4℃保存。

顯色劑:粉劑×6 瓶,4℃避光保存, 臨用前根據(jù)用量每瓶加1mL 雙蒸水溶解,再加4mL 試劑二混勻。

樣本處理

新鮮土樣自然風(fēng)干或 37 度烘箱風(fēng)干,過(guò) 30~50 目篩。

測(cè)定操作表

 

對(duì)照管

測(cè)定管

樣本(g

0.06

0.06

甲苯

40

40

振蕩混勻,室溫放置 15min

緩沖液(μL

1000

 

試劑一(μL

 

1000

混勻,37℃孵育 24h10000g,4℃離心 5min,取上清

上清

500

500

顯色劑(μL

500

500

混勻,靜置 15min,測(cè)定 700nm 處吸光值,A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

酶活性計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線:y = 1.759x + 0.0084,R2 = 0.9977;x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度(μmol/mL),y 為吸光值△A。

酶活性定義: 37℃,pH5.5 的條件下,每克土樣每小時(shí)從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放 1μmol 的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。

植酸酶活性(μmol/d /g 土樣)=(△A-0.0084)÷1.759×V 反總÷W÷T

=9.84×(△A-0.0084)

V 反總:反應(yīng)總體積,1.04mL;T:反應(yīng)時(shí)間,1d;W:樣本質(zhì)量,0.06g。

注意事項(xiàng)

1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制,每一瓶是 5 個(gè)樣本的用量,新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過(guò)期,應(yīng)放棄使用。

2、ΔA 線性范圍為 0.01-1。


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