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直鏈淀粉含量試劑盒說(shuō)明書(shū)（分光光度法）

貨號(hào)：LE-1-082

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

直鏈淀粉是D-葡萄糖基以a-(1,4)糖苷鍵連接的多糖鏈，其含量測(cè)定對(duì)于評(píng)價(jià)食品營(yíng)養(yǎng)價(jià)值和調(diào)查植物體內(nèi)糖代謝都有重要意義。 

測(cè)定原理： 

利用 80％乙醇可以把樣品中可溶性糖與淀粉分開(kāi)，直鏈淀粉與碘形成的絡(luò)合物在 620nm 下有吸收峰。 

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰、乙醚和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 50mL×1 瓶；4℃保存；

試劑二：乙醚 50mL×1 瓶；(自備)

試劑三：液體 50mL×1 瓶；4℃保存；

試劑四：液體 4mL×1 瓶； 4℃保存；

試劑五：液體 1mL×1 瓶；4℃保存；

淀粉提?。?/span>

稱(chēng)取 0.01~0.02g 烘干樣本（建議稱(chēng)取約 0.01g）于研缽中研碎，加入 1mL 試劑一，充分勻漿后轉(zhuǎn)移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入1mL 試劑二（乙醚）振蕩 5min，3000g，25℃離心 5min，棄上清，留沉淀，加入 1mL 試劑三充分溶解，90℃水浴 10min，冷卻后待測(cè)。

測(cè)定步驟：

分光光度計(jì) 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm，蒸餾水調(diào)零。

測(cè)定管：在 EP 管中依次加入 100uL 樣本， 70uL 試劑四，600uL 蒸餾水，10uL 試劑五，220uL 蒸餾水，混勻，測(cè)定 620nm 處吸光值，記為 A 測(cè)定。

空白管：在EP 管中依次加入 100uL 試劑三， 70uL 試劑四，600uL 蒸餾水，10uL 試劑五，220uL 蒸餾水，混勻，測(cè)定 620nm 處吸光值，記為 A 空白。

直鏈淀粉含量計(jì)算：

標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y=1.755x+0.0062；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

1、按照蛋白濃度計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/mg prot)=[(A 測(cè)定-A 空白-0.0062)×V1]÷1.755 ÷(V1×Cpr)

=0.57×(A 測(cè)定-A 空白-0.0062) ÷Cpr

2、按樣本干重計(jì)算

直鏈淀粉含量(mg/g 干重)= [(A 測(cè)定-A 空白-0.0062)×V1] ÷1.755÷(W×V1÷V2)

=0.57×(A 測(cè)定-A 空白-0.0062) ÷W

V1：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積，1 mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g