產(chǎn)品名稱：吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)測試盒
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣,100管/48樣
產(chǎn)品貨號：LE-1-201,LE-2-201
產(chǎn)品報(bào)價：
免費(fèi)咨詢：0551-66107970
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
檢測方法 |
規(guī)格 |
售價（元） |
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LE-1-201 |
吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)測試盒 |
分光光度法 |
50管/24樣 |
550 |
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LE-2-201 |
吡咯啉-5-羧酸合成酶(P5CS)測試盒 |
微量法 |
100管/48樣 |
1000 |
吡咯啉-5-羧酸合成酶試劑盒說明書(分光光度法)
貨號：LE-1-201
正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定
測定意義：
脯氨酸是植物體內(nèi)適應(yīng)逆境脅迫的一種重要的滲透調(diào)節(jié)物質(zhì)。高等植物中脯氨酸代謝因其初 始底物不同，分為谷氨酸( Glu) 和鳥氨酸( Orn) 兩條合成途徑。吡咯啉-5-羧酸合成酶（P5CS， Δ1-pyrroline-5-carboxylate synthetase）是以谷氨酸為前體合成脯氨酸途徑的關(guān)鍵酶，對植物 適應(yīng)逆境脅迫起關(guān)鍵作用。
測定原理：
吡咯啉-5-羧酸合成酶催化谷氨酸生成 P5C 過程中分解 ATP 生成 ADP 和無機(jī)磷，通過鉬酸 銨比色法測定單位時間內(nèi)產(chǎn)生無機(jī)磷的量可確定 P5CS 活性。
需自備的儀器和用品：
可見外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。
試劑組成和配制：
試劑一：液體 60 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑二：液體 6 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑三：液體 6 mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四：粉劑×1瓶，4℃保存，用時加入 25 mL 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；
試劑五：粉劑×1瓶，4℃保存，用時加入 25 mL 蒸餾水，溶解后 4℃保存一周；
試劑六：液體 25mL×1 瓶，室溫保存；
試劑七：10mmol/L 標(biāo)準(zhǔn)磷貯備液 10mL×1 瓶，4℃保存。
0.5μmol/mL 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液配制：將試劑七 20 倍稀釋，即取 0.1mL 試劑七加 1.9mL 蒸餾水 充分混勻。
定磷劑的配制：按 H2O: 試劑四:試劑五:試劑六=2:1:1:1 的比例配制，配好的定磷劑應(yīng)為淺 黃色。若無色則試劑失效，若是藍(lán)色則為磷污染，定磷劑現(xiàn)用現(xiàn)配。
注意：配試劑最好用新的燒杯、玻棒和玻璃移液器，也可以用一次性塑料器皿，避免磷污染。
樣品酶液的制備：
1、組織樣品：按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 試劑一），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心 10min ，取上清，置冰上待測。
2、血清（漿）樣品：直接檢測。
操作步驟
1、分光光度計(jì)或酶標(biāo)儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 660nm。
2、酶促反應(yīng)（在 EP 管中加入下列試劑）
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對照管 |
測定管 |
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試劑二 (μL） |
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100 |
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樣本 (μL） |
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100 |
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試劑三 (μL） |
100 |
100 |
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試劑二 (μL） |
100 |
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樣本 (μL） |
100 |
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3、定磷（在 EP 管或 96 孔板中加入下列試劑）
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空白管 |
標(biāo)準(zhǔn)管 |
對照管 |
測定管 |
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0.5μmol/ml 標(biāo)準(zhǔn)磷應(yīng)用液(μL） |
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100 |
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上清液(μL） |
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100 |
100 |
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蒸餾水 (μL） |
100 |
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定磷試劑(μL） |
1000 |
1000 |
1000 |
1000 |
注意：
1、由于每一個樣都必須做對照，本試劑盒 50 管保證測 24 份 P5CS 活性。
2、此法具有微量、靈敏、快速的特點(diǎn)。所以對測定所用試管要求嚴(yán)格無磷。
3、空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管。每個測定管設(shè)一個對照管。
P5CS 活性計(jì)算：
1、血清（漿）P5CS 活力的計(jì)算:
單位定義：每小時每毫升血清（漿） 中 P5CS 消耗 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
P5CS 活力(μmol/h/mL）=C 標(biāo)準(zhǔn)管×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×V 總 ÷V 樣÷T
=9 ×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）
2、組織中 P5CS 活力的計(jì)算：
（1）按蛋白濃度計(jì)算：
單位定義：每小時每毫克組織蛋白中 P5CS 消耗 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
P5CS 活力(μmol/h /mg prot)=C 標(biāo)準(zhǔn)管×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×V 總÷（Cpr×V 樣）÷T
=9 ×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷Cpr
（2）按樣本鮮重計(jì)算：
單位定義：每小時每克組織中 P5CS 消耗 ATP 產(chǎn)生 1μmol 無機(jī)磷的量為一個酶活力單位。
P5CS 活力(μmol/h /g 鮮重)=C 標(biāo)準(zhǔn)管×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）×V 總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T
=9 ×（A 測定管-A 對照管）÷（A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管）÷W
C 標(biāo)準(zhǔn)管：標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.5μmol/mL；V 總：酶促反應(yīng)總體積，0.3mL；V 樣：加入樣本體 積，0.1mL ；V 樣總：加入提取液體積，1mL；T：反應(yīng)時間，1/6 小時；Cpr：樣本蛋白質(zhì) 濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。
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