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測(cè)定意義

半胱氨酰亞砜裂解酶（CSL）廣泛存在于百合科蔥屬(如大蒜和洋蔥)，十字花科蕓薹屬(如卷心菜，菜花，西蘭花)，以及豆科中的合金歡屬中，并通常被稱為蒜氨酸酶(Alliinase)。香菇酸在γ-谷氨酰轉(zhuǎn)肽酶和半胱氨酸亞砜裂解酶的作用下轉(zhuǎn)化成香菇精，以及產(chǎn)生丙酮酸、乙醛、甲醛和NH3。CSL 是內(nèi)源性甲醛生成的關(guān)鍵酶之一，測(cè)定 CSL 活性對(duì)于研究食品安全具有重要意義。

測(cè)定原理

CSL 催化 S-甲基-L-半胱氨酸亞砜反應(yīng)產(chǎn)生丙酮酸，與 2,4-二硝基苯肼反應(yīng)，在堿性條件下顯棕紅色，在 510nm 下有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器

天平、研缽、離心機(jī)、分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存，臨用前加入 2mL 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃避光保存，臨用前加入 10mL 水溶解，用不完的試劑分裝后-20℃ 保存；

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 6mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑五：液體 30mL×1 瓶，4℃保存。 

樣本處理

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿，4℃浸提 40min。12000g 4℃離心 10min，取上清，置冰上待測(cè)。

測(cè)定操作

計(jì)算公式

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 1.4626x + 0.0027，R² = 0.9993；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度：μmol/mL；y 為吸光度△A

1、按蛋白含量計(jì)算

C-S lyase 活性（μmol/min/mg prot）=（△A -0.0027）÷ 1.4626×V 樣÷(V 樣×Cpr )÷T=0.034×（△A-0.0027）÷ Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算

C-S lyase 活性（μmol/min/g 鮮重）=（△A -0.0027）÷ 1.4626×V 樣÷(V 樣÷V 樣總×W )÷T=0.034×（△A-0.0027）÷ W

V 樣，加入樣本上清體積，0.1mL；V 樣總：加入提取液體積，1mL；Cpr：蛋白濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T，反應(yīng)時(shí)間，0min。

注意事項(xiàng)

1、若測(cè)定結(jié)果中吸光值超過(guò) 2，請(qǐng)將樣本稀釋后進(jìn)行測(cè)定，并在計(jì)算公式中乘以稀釋倍數(shù)。香菇類樣本活性較大，可能需要稀釋 80-100 倍。