產(chǎn)品名稱：果膠甲酯化程度測試盒
產(chǎn)品規(guī)格：50管/48樣,100管/96樣
產(chǎn)品貨號：LE-1-326,LE-2-326
產(chǎn)品報價：
免費咨詢：0551-66107970
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貨號 |
產(chǎn)品名稱 |
檢測方法 |
規(guī)格 |
售價（元） |
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LE-1-326 |
果膠甲酯化程度測試盒 |
可見分光光度法 |
50管/48樣 |
1300 |
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LE-2-326 |
果膠甲酯化程度測試盒 |
微量法 |
100管/96樣 |
2400 |
果膠甲酯化程度試劑盒說明書（可見分光光度法）
測定意義
植物細胞壁中的果膠是植物初生細胞壁的主要成分，除了起結構支撐、物質運輸?shù)茸饔猛?，還具有抵抗逆境的作用。果膠甲酯化程度影響了細胞壁的堅韌程度及其抗性。
測定原理
果膠甲酯鍵經(jīng)皂化處理后釋放出甲醇，甲醇與 2,4-戊二酮反應顯色，在 412nm 下測定吸光值；同時半乳糖醛酸在 70℃下與濃硫酸反應生成 5-甲酰基-2-呋喃甲酸，5-甲?；?2-呋喃甲酸與 3,5-二甲基苯酚反應產(chǎn)生有色物質，在 450nm 下有最大吸光值。以甲醇生成量與半乳糖醛酸含量的比值代表果膠甲酯化程度。
自備實驗用品及儀器
天平、低溫離心機、分光光度計、1mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、蒸餾水、硫酸。
試劑組成和配制
提取液：液體 60mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：液體 6mL×1 瓶，4℃保存。
試劑二：液體 6mL×1 瓶，4℃保存。
試劑三：液體 4mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑四：液體 4mL×1 瓶，4℃避光保存。
試劑五：粉劑×1 瓶，4℃避光保存；臨用前加入 32mL 試劑六充分溶解待用，用不完的試劑 4℃避光保存。
試劑六：液體 35mL×1 瓶，4℃保存。
試劑七：液體 4mL×1 瓶，4℃保存。
試劑八：液體 3mL×1 瓶，4℃避光保存。
酶液提取
稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水，進行冰浴勻漿。10000g 4℃離心 10min，棄上清，留沉淀。沉淀中加入 1mL 提取液，混勻后 90℃水浴 2h，冷卻至室溫，10000g4℃離心 10min，取上清待測。
測定操作表
1、甲醇生成量測定
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試劑名稱（μL） |
空白管 |
測定管 |
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樣本 |
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150 |
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提取液 |
150 |
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試劑一 |
75 |
75 |
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混勻，室溫靜置 30min |
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試劑二 |
75 |
75 |
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試劑三 |
60 |
60 |
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混勻，冰浴至紫色褪去，約需要 15-30min |
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試劑四 |
60 |
60 |
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水 |
180 |
180 |
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混勻，室溫反應 1h |
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試劑五 |
600 |
600 |
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混勻，60℃反應 15min。取 1mL 加入 1mL 玻璃比色皿，測定 412nm 下吸光值A 測定與 A 空白。△A1=A 測定-A 空白 |
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試劑名稱（μL） |
測定管 |
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樣本 |
60 |
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試劑七 |
60 |
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濃硫酸 |
960 |
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70℃水浴 10min，冷卻至室溫 |
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試劑八 |
48 |
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充分混勻，靜置 10min 后取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿測定 450nm 處吸光值A1 與 400nm 吸光值 A2，△A2=A1-A2。 |
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計算公式
1、甲醇生成量計算
標曲為 y = 0.0596x + 0.009，R2 = 0.9997；x 為標準品濃度，μmol/mL；y 為吸光值△A1。
甲醇生成量（μmol/g 鮮重）=（ΔA1-0.009） ÷ 0.0596÷W×V 樣總
=16.78×（ΔA1-0.009）÷W
2、半乳糖醛酸含量計算
標準曲線為 y = 0.517x - 0.1746，R2 = 0.9986；x 為標準品濃度，μmol/mL；y 為吸光值△A2。
半乳糖醛酸（μmol/g 鮮重）=(ΔA2+0.1746) ÷0.517÷W×V 樣總
=1.93×(ΔA2+0.1746)÷W
果膠甲酯化程度（%）=甲醇生成量÷半乳糖醛酸含量×100% V 樣總：加入提取液體積，1mL；W，樣本質量，g。
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