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共價(jià)結(jié)合型果膠(CSP)含量試劑盒說(shuō)明書(shū)（分光光度法）

貨號(hào)：LE-1-327

正式測(cè)定前取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

果膠是構(gòu)成細(xì)胞初生壁和中膠層的主要成分，主要由原果膠、果膠酸甲酯和果膠酸組成。 果膠中含有半乳糖醛酸、乳糖、阿拉伯糖、葡萄糖醛酸等， 是許多高等植物細(xì)胞壁中含量最  豐富的多糖成分， 其獨(dú)特的物理、化學(xué)性質(zhì)影響著植物源食品的口感和品質(zhì)。果膠間以 Ca2+  橋及其他離子鍵、氫鍵、糖苷鍵、酯鍵和苯環(huán)偶聯(lián)的方式交聯(lián)，  通過(guò)不同的抽提方法可以提  取各種形式的果膠，如水溶性果膠（WSP）、離子結(jié)合型果膠（ISP）和共價(jià)結(jié)合果膠（CSP）。 

測(cè)定原理：

利用帶有螯合劑的堿溶液提取共價(jià)結(jié)合型果膠（CSP），采用咔唑比色法測(cè)定果膠含量。果 膠水解成半乳糖醛酸，在硫酸溶液中與咔唑試劑進(jìn)行縮合反應(yīng)，  生成物質(zhì)在 530 nm 處有最 大吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、水浴鍋、可調(diào)式移液器、 1mL 玻璃比色皿、  80％乙醇、丙酮、濃硫酸（不 允許快遞）、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 50mL× 1 瓶， 4℃保存。

試劑二：液體 50mL× 1 瓶， 4℃保存。

試劑三：標(biāo)準(zhǔn)液 1mL× 1 支， 4℃保存。

試劑四：液體 5 mL× 1 瓶， 4℃保存；

樣品的前處理：

1 、 細(xì)胞壁的提?。?nbsp;取約 0.3g 樣本， 加入 1mL 80％乙醇，室溫快速勻漿， 95℃水浴 20min， 冷卻至室溫，4000g  25℃離心 10min，棄上清。沉淀加入 1.5mL80％乙醇和丙酮各洗一  遍（渦旋振蕩 2min 左右， 4000g  25℃離心 10min，棄上清即可），沉淀即為粗細(xì)胞壁，  加入 1mL 試劑一（去除淀粉）浸泡 15 小時(shí)， 4000g  25℃離心 10min，棄上清，將沉淀  干燥，稱(chēng)重得細(xì)胞壁物質(zhì)（CWM）。

2 、 CSP 的提?。悍Q(chēng)取烘干的 CWM 3mg，加入 1mL 試劑二，充分勻漿(若烘干物質(zhì)質(zhì)地堅(jiān)硬， 可先研碎后再加入 1mL 試劑二勻漿， 或者用勻漿器勻漿) 。8000g 4℃離心 10min，取上清液待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上， 調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 530nm 處， 蒸餾水調(diào)零； 試劑三和試劑四 37℃ 預(yù)熱 10min 以上；

2、操作表：

混勻

混勻 95℃水浴 5min 后， 530nm 處讀取吸光值，空白管、標(biāo)準(zhǔn)管、對(duì)照管和測(cè)定管吸光值分 別記為 A1 、A2 、A3 和 A4。若 A 大于 2， 需將待測(cè)樣本用蒸餾水稀釋?zhuān)上♂?nbsp;10 倍或 20 倍）。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只要做一管，每個(gè)測(cè)定管需設(shè)一個(gè)對(duì)照管。

CSP 含量計(jì)算：

CSP 含量(mg /g  干重)= (C 標(biāo)準(zhǔn)×V1) ×(A4-A3)÷(A2-A1)÷(W×V1÷V2) ×稀釋倍數(shù) 

=0.05×(A4-A3)÷(A2-A1)÷W×稀釋倍數(shù)

C 標(biāo)準(zhǔn)： 標(biāo)準(zhǔn)管濃度，0.05mg/mL；V1：加入樣本體積，0.1mL；V2：加入提取液體積， 1mL； W：樣本干重， g。

注意：最低檢測(cè)限為 50μg /g  干重