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葉綠體分離和葉綠體酶提取試劑盒說明書（差速離心法）

貨號(hào)：LE-1-293

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定 

測(cè)定意義

葉綠體是植物細(xì)胞內(nèi)最重要、最普遍的質(zhì)體，它是進(jìn)行光合作用的細(xì)胞器。葉綠體利用其葉 綠素將光能轉(zhuǎn)變?yōu)榛瘜W(xué)能，把 CO₂ 與水轉(zhuǎn)變?yōu)樘恰Ｈ~綠體是世界上成本最低、創(chuàng)造物質(zhì)財(cái) 富最多的生物工廠，準(zhǔn)確和全面分離保持正?；钚缘娜~綠體已經(jīng)成為許多研究的前提。

測(cè)定原理

利用專門試劑溫和勻漿組織或細(xì)胞，再采用差速離心法從勻漿中分離完整葉綠體，可以得到 保持活性的葉綠體酶。

需自備的儀器和用品

臺(tái)式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、勻漿器/研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制

試劑一：液體 100mL ×1 瓶，-20℃保存； 

樣本的前處理：

1、稱取約 0.1g 組織或收集 500 萬細(xì)胞，加入 1mL 試劑一，用冰浴勻漿器或研缽勻漿，很 快研磨或搗碎，30 秒內(nèi)完成，使之成為勻漿液。

2、將勻漿液于 200g（離心率），4℃離心 1min。

3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，1500g ，4℃離心 5min。

4、棄上清液，于沉淀中加入 0.5mL 試劑一混勻配成葉綠體懸浮液?；靹蚝鬁y(cè)定葉綠體酶活性。