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土壤外切- β-1 ，4-葡聚糖酶/纖維二糖水解酶（S-C1）試劑盒說明書（可見分光光度法）

測定意義：

C1（EC3.2.1.91）存在于細(xì)菌、真菌和動物體內(nèi)，是纖維素酶系的組份之一，C1催化多聚糖 鏈的末端非還原端釋放出纖維二糖和葡萄糖。

測定原理：

采用3,5－二硝基水楊酸法測定C1催化微晶纖維素降解產(chǎn)生的還原糖的含量。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 15mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：液體 60mL×1 瓶，4℃保存；

樣品測定的準(zhǔn)備：

稱取約 0.1g 新鮮土樣或風(fēng)干土樣，加入 1mL 提取液，進(jìn)行冰浴勻漿，室溫振蕩提取 30min，然后 10000g 4℃離心 10min ，取上清，置冰上待測。

測定步驟：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 540nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

混勻，37℃準(zhǔn)確水浴 2h

混勻， 90℃水浴 10min（蓋緊，防止水分散失），冷卻后，測 540nm 下吸光值 A，計 算 ΔA=A 測定管-A 對照管。每個測定管需設(shè)一個對照管。

S-C1 活性計算

標(biāo)準(zhǔn)條件下測定回歸方程為 y = 6.4078x - 0.0673；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。 

單位的定義：每 g 土樣每分鐘催化產(chǎn)生 1 μg  葡萄糖定義為一個酶活力單位。

S-C1 活力(μg /min /g 鮮重)=[1000×(ΔA+0.0673) ÷6.4078×V 反總]÷(W×V 樣÷V 樣總)

÷T =14.305×(ΔA+0.0673) ÷W

1000 ：1mg/mL=1000ug/mL；V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.55mL； V 樣：加入樣本體積， 0.05 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時間，120 min；W：樣本質(zhì)量，g。