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半乳糖醛酸試劑盒說明書(分光光度法) 

貨號：LE-1-323

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

果膠是一類廣泛存在于植物細胞壁的初生壁和細胞中間片層的雜多糖。半乳糖醛酸是果膠酸 的組成單位，也是果膠的主要成分， 存在于植物的粘液、樹膠和細菌多糖中。

測定原理

半乳糖醛酸在 70℃下與濃硫酸反應生成 5- 甲?；?/span>-2-呋喃甲酸， 5- 甲?；?/span>-2-呋喃甲酸與 3,5- 二甲基苯酚反應產生有色物質， 在 450nm 下有最大吸光值。

自備實驗用品及儀器

天平、低溫離心機、 分光光度計、1mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、 硫酸、蒸餾水。

試劑組成和配制

提取液：液體 60mL×1 瓶， 4℃保存。

試劑一：液體 4mL×1 瓶， 4℃保存。

試劑二：液體 3mL×1 瓶， 4℃避光保存。

酶液提取

稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水，進行冰浴勻漿。10000g  4℃離心 10min ，棄上清，留沉淀。沉淀中加入 1mL 提取液， 混勻后 90℃水浴 2h，冷卻至室溫，10000g4℃離心 10min，取上清待測。

測定操作表

計算公式

標準曲線為 y = 4.5028x - 0.3763 ，R² = 0.9969；x 為標準品濃度， mg/mL；y 為吸光值△A。

半乳糖醛酸(μmol/g  鮮重）=(ΔA+0.3763) ÷ 4.5028÷W×V 樣總÷ 194 × 1000

= 1.14×(ΔA+0.3763)÷W

V 樣總：加入提取液體積， 1mL；W，樣本質量， g；194，半乳糖醛酸分子量。