伊人久久大香线焦|久久青青草国产第一页|亚洲国产九九九热视频|超乳视频爆乳无码免费专区|欧美日韩亚洲视频一区二区|少妇高潮惨叫喷水在线观看|亚洲区欧美区偷拍区中文字幕|国产日韩一区二区三区在线观看

脂氧合酶活性測定試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-141

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

LOX 廣泛存在于動植物組織中，催化不飽和脂肪酸氧化反應，導致膜脂過氧化。在生物體 的生長發(fā)育、成熟衰老及逆境脅迫過程中具有重要作用。

測定原理：

LOX 催化亞油酸氧化，氧化產(chǎn)物在 280nm 處有特征吸收峰；測定 280nm 吸光度增加速率， 來計算 LOX 活性。

自備儀器和用品：

研缽、冰、臺式離心機、紫外分光光度計、1mL 石英比色皿、可調(diào)式移液槍和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加入 1mL 試劑一）進行冰浴勻漿。16000g ，4℃離心 20min ，取上清置冰上待測。

測定步驟：

①  分光光度計預熱 30 min ，調(diào)節(jié)波長到 280nm ，蒸餾水調(diào)零。

②  在試劑三中加入 25mL 試劑二（振蕩混勻 1min），在 30℃水浴中預熱 10 min 以上。用不 完的試劑 4℃保存。(注意：試劑三為微量粉劑可能肉眼看不見，正常溶解即可）

③  對照管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 樣本和 900μL 試劑二，30℃反應 30min 后，記錄 A 對照。

④  測定管：依次在 1mL 石英比色皿中加入 100μL 樣本和 900μL 試劑三，30℃反應 30min 后，記錄 A 測定。

⑤  ΔA=A 測定-A 對照

 LOX 活性計算公式：

1、按照蛋白濃度計算

活性單位定義：25℃中每毫克蛋白每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。

LOX (U/mg prot) = ΔA×V 反總÷(Cpr×V 樣)÷T×100 

= 33.33×ΔA÷Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計算

活性單位定義：25℃中每克組織每分鐘催化吸光值變化 0.01 個單位為 1 個酶活單位。

LOX (U/g  鮮重) =ΔA×V 反總÷(W×V 樣÷V 樣總)÷T×100 

= 33.33×ΔA÷W

Cpr：上清液蛋白濃度，mg/mL，需另外測定，建議使用本公司BCA 蛋白質(zhì)含量測定試劑盒； 

V 樣：加入反應體系中上清液體積，100μL=0. 1mL；V 反總：反應總體積，1mL；V 樣總： 上清液總體積，1mL；W：樣本質(zhì)量，g；T ：反應時間，30min。