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植物葉綠素含量檢測試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-241

正式測定前取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測的意義：

可見分光光度法植物葉綠素廣泛存在于綠色植物組織中，其含量與光合作用、營養(yǎng)狀況密切相關(guān)，是反應(yīng)植物生長狀況的重要指標(biāo)。

測定原理：

葉綠素a和葉綠素b在645nm和663nm處有最大吸收，根據(jù)經(jīng)驗公式可計算得葉綠素a和葉綠素b 以及總?cè)~綠素含量。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：粉劑×1瓶，4℃保存。

自備實驗用品及儀器：

天平、研缽、可見分光光度計、1 mL玻璃比色皿、10mL玻璃試管，錫箔紙、無水乙醇、丙酮。

操作步驟：

1、稱取約新鮮植物葉片或其它綠色組織，去掉中脈，稱取約0.1g，剪碎，用蒸餾水洗干凈。

2、提取液的準(zhǔn)備：取200mL無水乙醇和400mL丙酮，充分混勻待用。

3、加入1mL蒸餾水，少量試劑一（約10mg），在黑暗或弱光條件下充分研磨，轉(zhuǎn)入10mL玻璃試管。

4、用提取液沖洗研缽，將所有沖洗液轉(zhuǎn)入玻璃試管，用提取液定容至10mL，玻璃試管置于黑暗條件下或者包上錫箔紙浸提3h，觀察試管底部組織殘渣完全變白則提取完全，若組織殘渣未完全變白，繼續(xù)浸提至其完全變白。

5、取浸提液1mL于1mL玻璃比色皿，提取液調(diào)零，測定663nm和645nm處吸光值，分別記為A₆₆₃和A₆₄₅ 。

計算公式：

葉綠素a含量（mg/g）=（12.7×A₆₆₃ – 2.69 ×A₆₄₅）×V提×D÷m÷1000

= 0.01×（12.7×A₆₆₃ – 2.69 ×A₆₄₅）×D÷m

葉綠素b含量（mg/g）=（22.9×A₆₄₅ – 4.68 ×A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

= 0.01×（22.9×A₆₄₅ – 4.68 ×A₆₆₃）×D÷m

葉綠素總含量（mg/g）=（20.21×A₆₄₅ +8.02 ×A₆₆₃）×V提×D÷m÷1000

= 0.01×（20.21×A₆₄₅ +8.02 ×A₆₆₃）×D÷m

V提：提取液體積，10mL；D：稀釋倍數(shù)；m：樣本質(zhì)量，g

注意事項：

1、葉綠素對光敏感，研磨和提取等操作盡量避光或者在弱光下進(jìn)行。

2、一定要浸提至組織殘渣完全變白，否則提取不充分。

3、用提取液沖洗研缽一定要沖洗至所有的綠色物質(zhì)被轉(zhuǎn)移至玻璃試管。

4、測定時吸光值超過1，可進(jìn)行適當(dāng)稀釋。