伊人久久大香线焦|久久青青草国产第一页|亚洲国产九九九热视频|超乳视频爆乳无码免费专区|欧美日韩亚洲视频一区二区|少妇高潮惨叫喷水在线观看|亚洲区欧美区偷拍区中文字幕|国产日韩一区二区三区在线观看

本試劑盒僅限于科研使用，請勿用于醫(yī)藥、臨床診斷或治療，食品及化妝品等用途。

檢測原理

試劑盒采用雙抗體一步夾心法酶聯免疫吸附試驗 (ELISA) 。往 預先包被褪黑素 (MT) 抗體的包被微孔中，依次加入標本、標準品、 HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在 過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃 色。顏色的深淺和樣品中的褪黑素(MT)呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度 (OD 值)，計算樣品濃度。

樣品收集、處理及保存方法

1.  樣本不能含疊氮鈉（NaN3），因為疊氮鈉（NaN3）是辣根過氧化物酶（HRP）的抑制劑。

2.  標本采集后盡早進行提取，提取按相關文獻進行。

3.  植物萃取液或其它相關樣本：請1000 x g離心20分鐘，取上清即可檢測。

4.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品

1. 酶標儀 (450nm)

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項

1.  試劑盒保存在 2-8℃ ，使用前室溫平衡 20 分鐘。從冰箱取出的 濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正?，F象，水浴加熱使結晶完全溶解 后再使用。

2.  實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封 (低溫干燥) 保 存。

3.  濃度為 0 的 S0 號標準品即可視為陰性對照或者空白；按照說明 書操作時樣本已經稀釋 5 倍，最終結果乘以 5 才是樣本實際濃度。

4.  嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.  所有液體組分使用前充分搖勻。

試劑盒組成

注：標準品 (S0-S5) 濃度依次為：0、50、100、200、400、800 pg/mL

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按 1：20 稀釋，即 1 份的 20×洗滌 緩沖液加 19 份的蒸餾水。

洗板方法

1.  手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置 1min 后甩盡 孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板 5 次。

2.  自動洗板機：每孔注入洗液 350 μL，浸泡 1min，洗板 5 次。

操作步驟

1.  從室溫平衡 20min 后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自 封袋密封放回4℃。

2.  設置標準品孔和樣本孔，標準品孔各加不同濃度的標準品 50 μ L；

3.  樣本孔先加待測樣本 10 μL，再加樣本稀釋液 40 μL；空白孔不 加。

4.  除空白孔外，標準品孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶

(HRP) 標記的檢測抗體 100 μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋 或恒溫箱溫育 60min。

5.  棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置 1min，甩去 洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板 5 次 (也可用洗板機洗板)。

6.  每孔加入底物 A、B 各 50 μL，37℃避光孵育 15min。

7.  每孔加入終止液 50 μL，15min 內，在 450nm 波長處測定各孔的 OD 值。

結果判斷

繪制標準曲線：在 Excel 工作表中，以標準品濃度作橫坐標，對應 OD 值作縱坐標，繪制出標準品線性回歸曲線，按曲線方程計算各樣 本濃度值。

試劑盒性能

1.  準確性：標準品線性回歸與預期濃度相關系數 R 值，大于等于 0.9900。

2.  靈敏度：最低檢測濃度小于 10 pg/mL。

3.  特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

4.  重復性：板內、板間變異系數均小于 15%。

5.  貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

6.  有效期：6 個月