產品名稱：琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒
產品規(guī)格：50管/48樣,100管/96樣
產品貨號：LE-1-213,LE-2-213
產品報價：
免費咨詢：0551-66107970
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貨號 |
產品名稱 |
檢測方法 |
規(guī)格 |
售價（元） |
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LE-1-213 |
琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒 |
分光光度法 |
50管/48樣 |
260 |
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LE-2-213 |
琥珀酸脫氫酶(SDH)測試盒 |
微量法 |
100管/96樣 |
500 |
琥珀酸脫氫酶（SDH）活性檢測試劑盒說明書(分光光度法)
貨號：LE-1-213
正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定
測定意義：
SDH（EC 1.3.5.1）廣泛存在于動物 、植物 、微生物和培養(yǎng)細胞中 。SDH 是線粒體的一種標志酶，位于線粒體內膜上的一種膜結合酶，是連接呼吸電子傳遞和氧化磷酸化的樞紐之一 。此外，為多種原核細胞 產能的呼吸鏈提供電子。
測定原理：
SDH 催化琥珀酸脫氫生成延胡索酸，脫下的氫通過吩嗪二甲酯硫酸（PMS）傳遞還原 2,6-二氯酚靛酚 （DCPIP） ，并且在 600nm 處具有特征吸收峰，通過 600nm 吸光度的變化，測定 2．6-DPIP 的還原速度， 代表 SDH 酶活性。
產品內容：
試劑一：液體 50mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑二：液體 10mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑三：液體 1mL×1 瓶，-20℃保存；
試劑四：液體 5mL×1 瓶，4℃保存；臨用前加入到試劑三中溶解待用；
試劑五：粉劑×1 支 ，4℃保存，臨用前加入 2ml 蒸餾水，用不完的試劑仍 4℃保存；
試劑六：粉劑×1 支 ，-20℃保存；臨用前加入 2ml 蒸餾水，用不完的試劑 4℃保存。
自備儀器和用品：
可見分光光度計 、水浴鍋 、 臺式離心機 、可調式移液器 、 1 ml 玻璃比色皿 、研缽 、冰和蒸餾水。
樣本的前處理：
組織 、細菌或細胞中胞漿蛋白與線粒體蛋白的分離：
1、稱取約 0. 1g 組織或收集 500 萬細菌或細胞，加入 1ml 試劑一和 10μl 試劑三，用冰浴勻漿器或研缽勻漿。
2、將勻漿 600g ，4℃離心 5min。
3、棄沉淀，將上清液移至另一離心管中，11000g ，4℃離心 10min。
4、上清液即胞漿提取物，可用于測定從線粒體泄漏的 SDH（此步可選做）。
在步驟④的沉淀中加入 200μl 試劑二和2μl 試劑三，超聲波破碎（冰浴，功率 20％或 200W，超聲 3 秒， 間隔 10 秒，重復 30 次） ，用于線粒體 SDH 活性測定。
測定步驟和加樣表：
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試劑名稱 ( μl） |
測定管 |
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試劑四 |
60 |
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試劑五 |
30 |
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蒸餾水 |
800 |
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樣本 |
30 |
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試劑六 |
30 |
用蒸餾水調零后，依次加各試劑到 1 ml 玻璃比色皿中，在加入試劑六的同時開始計時，混勻，在 600 nm 波長下記錄 20 秒時的初始吸光度 A1 和 1 分 20 秒時的吸光度 A2，計算ΔA=A1-A2。
SDH 活性的計算：
1、按樣本蛋白濃度計算
單位的定義：每 mg 組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH 活性（nmol/min /mg prot）＝[ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(Cpr×V 樣) ÷T
= 1508×ΔA÷Cpr
2、按樣本鮮重計算
單位的定義：每 g 組織每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH 活性（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(W× V 樣÷V 樣總) ÷T
=304.6×ΔA÷W
3、按細菌或細胞密度計算
單位的定義：每 1 萬個細菌或細胞每分鐘消耗 1 nmol 2,6-二氯酚靛酚定義為一個酶活性單位。
SDH 活性（nmol/min /104 cell）＝[ΔA×V 反總÷ (ε×d）×109]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T
=0.609×ΔA
V 反總：反應體系總體積，9.5×10-4 L；ε：2,6-二氯吲哚酚摩爾消光系數(shù)，2. 1×104 L / mol /cm；d： 比色皿 光徑， 1cm；V 樣：加入樣本體積，0.03 ml；V 樣總：加入提取液體積，0.202 ml；T：反應時間， 1 min； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/ml；W：樣本質量，g；500：細菌或細胞總數(shù)，500 萬。
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