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產(chǎn)品名稱:氨基酸(AA)含量測試盒

產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣,100管/96樣

產(chǎn)品貨號:LE-1-196,LE-2-196

產(chǎn)品報價:

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貨號

產(chǎn)品名稱

檢測方法

規(guī)格

售價(元)

LE-1-196

氨基酸(AA)含量測試盒

分光光度法

50管/48樣

80

LE-2-196

氨基酸(AA)含量測試盒

微量法

100管/96樣

150

氨基酸( AA)含量檢測試劑盒說明書(分光光度法

貨號:LE-1-196

正式測定之前選擇 2-3 個預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品內(nèi)容:

試劑一:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。

試劑二:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑三:粉劑×1 瓶(棕色),4℃避光保存。臨用前加入 4 mL 無水乙醇,蓋緊后充分混勻,再加入 56mL 蒸餾水混勻,避光保存。
試劑四:粉劑×1 瓶,4℃避光保存。臨用前加 5mL 蒸餾水,充分溶解。
標(biāo)準(zhǔn)品:粉劑×1 瓶,10mg 半胱氨酸,4℃避光保存。臨用前加入 8.26mL 蒸餾水,得到 10μmol/mL的半胱氨酸標(biāo)準(zhǔn)溶液備用。
產(chǎn)品說明:
動物肝臟、腎臟是氨基酸代謝的主要器官,故尿中氨基酸的變化最能反應(yīng)肝、腎的生理狀態(tài)。另外,氨基酸還能反應(yīng)灼傷、傷寒等方面情況。植物體內(nèi)氨基酸含量對研究植物在不同條件下及不同生長發(fā)育時期氮代謝變化、植物對氮素的吸收、運(yùn)輸、同化及營養(yǎng)狀況等有重要意義。
氨基酸的α-氨基可與水合茚三酮反應(yīng),產(chǎn)生藍(lán)紫色化合物,在570nm有特征吸收峰;通過測定570nm吸光度,來計(jì)算氨基酸含量。
試驗(yàn)中所需的儀器和試劑:
臺式離心機(jī)、可見分光光度計(jì)、水浴鍋、1mL 玻璃比色皿、可調(diào)式移液槍、研缽/勻漿器、無水乙醇、冰和蒸餾水。
操作步驟:
一、粗酶液提?。?/strong>
a. 組織樣本:稱取約 0.1g 組織,加試劑一 1mL,室溫下充分研磨,轉(zhuǎn)移到 1.5 mL EP 管中,蓋緊后(防止水分散失)置于沸水浴提取 15 min;自來水冷卻后,10000rpm,4℃離心 10min,取上清液,待測。
b. 細(xì)菌或細(xì)胞樣本:收集細(xì)菌或細(xì)胞到離心管內(nèi),離心后棄上清;按照每 500 萬細(xì)菌或細(xì)胞加入1mL 試劑一,超聲波破碎細(xì)菌或細(xì)胞(功率 20%,超聲 3s,間隔 10s,重復(fù) 30  次);10000rpm, 4℃離心 10min,取上清液,待測。
二、測定步驟:
1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上,調(diào)節(jié)波長至 570nm,蒸餾水調(diào)零。
2、 操作表:

試劑名稱(μL

測定管

標(biāo)準(zhǔn)管

空白管

樣本

50

標(biāo)準(zhǔn)品

50

蒸餾水

50

試劑二

500

500

500

試劑三

500

500

500

試劑四

50

50

50

混勻后蓋緊瓶蓋(防止水分散失),置于沸水浴中保溫 15 min,冷卻后反復(fù)顛倒 EP 管數(shù)次,將測定管 8000rpm 離心 5min 后取上清,于 570nm 測定吸光值。顯色后務(wù)必在 30min 內(nèi)測完

氨基酸含量計(jì)算:

(1) 按樣本鮮重計(jì)算
氨基酸含量(μmol /g 鮮重)=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×
(V 樣總÷V 樣)÷W=10×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷W
(2) 按蛋白濃度計(jì)算
氨基酸含量(μmol /mg prot)=[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]÷
(Cpr×V 樣)=10×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管) ÷Cpr
(3) 按細(xì)菌或細(xì)胞數(shù)量計(jì)算
氨基酸含量 (μmol/104 cell) =[C 標(biāo)準(zhǔn)品×V 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]÷
(500×V 樣÷V 樣總)=0.02×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)品:標(biāo)準(zhǔn)品濃度,10μmol/mL;V 標(biāo)準(zhǔn)品:反應(yīng)體系中加入標(biāo)準(zhǔn)品體積,0.05 mL;W:樣品鮮重,g;V 樣:反應(yīng)體系中加入樣品體積,0.05 mL;V 樣總:樣品提取液總體積,1mL;Cpr: 上清液蛋白質(zhì)濃度,mg/mL;500:細(xì)菌或細(xì)胞總數(shù),500 萬個。
注意事項(xiàng):
1. 試劑盒中試劑三和試劑四均需臨用前配制,且避光保存。
2. 為保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性,需先取 1-2 個樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),如果測定的吸光值過高(高于 1.5),用蒸餾水稀釋后再測定。

3. 脯氨酸和羥脯氨酸與茚三酮反應(yīng)在 570nm 處無吸收峰,因此,570nm 處測定結(jié)果不含這兩種氨基酸的量。


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