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組織總磷含量檢測試劑盒說明書（分光光度法）

貨號(hào)：LE-1-258

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。（強(qiáng)腐蝕性，強(qiáng)氧化性）

試劑二：液體 11 mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×2 瓶，4℃避光保存。臨用前配制，加入 10 mL 蒸餾水，溶解后再加入 5 mL 試劑二，混勻。

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，1mmol/L 無機(jī)磷標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

磷的存在形態(tài)包括無機(jī)磷與有機(jī)磷。無機(jī)磷主要指磷酸根，參與生物體內(nèi)多種代謝，包括能量代謝、核酸代謝、蛋白質(zhì)磷酸化和脫磷酸化等。通過測定總磷與無機(jī)磷含量即可了解作物對(duì)磷的利用率，進(jìn)而為合理施肥提供依據(jù)。

總磷經(jīng)消化后，轉(zhuǎn)化成無機(jī)磷。鉬藍(lán)法是測定無機(jī)磷含量的經(jīng)典方法，一定條件下，鉬藍(lán)與磷酸根生成 660nm 有特征吸收峰的物質(zhì)，通過測定 660nm 光吸收，即可計(jì)算無機(jī)磷含量，進(jìn)而可計(jì)算出組織中總磷含量。

自備儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、離心機(jī)、水浴鍋、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿、蒸餾水和濃硫酸。

操作步驟：

一、有機(jī)磷消化：

取帶蓋試管，進(jìn)入精確稱取約 0.1 g 組織，加濃硫酸 1.0 mL，蓋緊（防止水分散失）后沸水浴10min 左右，待溶液呈黑色或棕色時(shí)取出。稍冷后，加試劑一 200μL，充分混勻，蓋緊后繼續(xù)沸水浴，直到溶液呈透明狀，取出室溫冷卻后，加蒸餾水 3.8 mL，充分混勻；室溫，10000rpm，離心10min，取上清液，待測。

二、測定：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、打開水浴鍋，調(diào)節(jié)溫度到 40℃。

3、測定：

混勻后置于 40℃水浴保溫 10min，室溫冷卻 10 min 后于 660 nm 測定吸光度，分別記為 A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測定管。

三、組織總磷含量計(jì)算：

總磷含量(mmol /g FW)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)]×V 總÷W

=0.005×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：1 mmol/L；V 總：上清液總體積，5 mL=0.005 L。W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、試劑三需臨用前配制，限當(dāng)天使用。

2、測定前先用 1~2 個(gè)樣品做預(yù)實(shí)驗(yàn)，如吸光值大于 0.8，需用蒸餾水做相應(yīng)稀釋。