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山梨醇含量試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-115

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

山梨醇廣泛存在于動物、植物、微生物和培養(yǎng)細胞中，不僅是糖運輸形式之一，而且與生物 抗逆性和食物風味密切相關(guān)。因此，在糖代謝、抗逆性和食品研究中經(jīng)常需要檢測山梨醇含 量變化。

測定原理：

山梨醇在堿性溶液中與銅離子形成藍色絡(luò)合物，在 655nm 波長有特征吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調(diào)式移液器、 1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一： 液體 10mL×1 瓶 ，4℃保存； 

試劑二： 液體 10mL×1 瓶 ，4℃保存。

山梨醇的提取：

按照組織質(zhì)量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.2g 組織，加入 2mL 蒸餾水），研磨成勻漿， 95℃水浴 10 分鐘（蓋緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃ 離心 10min，取上清液待測。

測定步驟

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 655nm，蒸餾水調(diào)零。

2、加樣表（在 EP 管中依次加入下列試劑）：

混勻后室溫靜置 15min，8000g，25℃離心 10min，取上清液測 655nm 下吸光值 A，計算 ΔA=A 測定管-A 空白管?？瞻坠苤灰鲆还堋?/span>

山梨醇含量計算：

1、標準條件下測定回歸方程為 y = 0.352x - 0.002；x 為標準品濃度（mg/mL）， y 為吸光值。

2、按照樣本質(zhì)量計算

山梨醇含量（mg /g  鮮重）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(W×V1÷V2)

=5.68×(ΔA＋0.002) ÷W

3、按照樣本蛋白濃度計算

山梨醇含量（mg /mg prot）＝[(ΔA＋0.002) ÷0.352×V1]÷(V1×Cpr)

=2.84×(ΔA＋0.002) ÷Cpr

V1：加入樣本體積， 1mL；V2：加入提取液體積，2 mL； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度， mg/mL； W：樣本質(zhì)量，g

注意：最低檢測限為 1μg/g 鮮重或 0.01μg /mg prot