正式測定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。

產(chǎn)品內(nèi)容:

提取液：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑 0.1g×3 支，4℃保存。（使用前根據(jù)樣品數(shù)，每支加 1mL 水溶解，每支為 10 個(gè)樣品用量）

試劑二：液體 10mL×1 瓶，4℃避光保存。試劑三：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑五：根據(jù)測定樣品量，將乙酸乙酯和無水乙醇等體積混合。（自備） 試劑六：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

蛋白質(zhì)羰基是多種氨基酸在蛋白質(zhì)的氧化修飾過程中的早期標(biāo)志，其含量高低表明蛋白質(zhì)氧化損傷程度的大小，是衡量蛋白質(zhì)氧化損傷的主要指標(biāo)。

羰基與 2,4-二硝基苯肼反應(yīng)生成紅色 2,4-二硝基苯腙，在 370nm 處有特征吸收峰。

自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器:

天平、恒溫水浴鍋、低溫離心機(jī)、漩渦震蕩儀、紫外分光光度計(jì)、1 mL 石英比色皿、蒸餾水， 無水乙醇和乙酸乙酯。

操作步驟：

一、樣品處理

組織樣品：稱取約 0.1g 組織樣品，加入 1mL 提取液，充分勻漿后于 4℃，5000rpm 離心 10min， 取上清，加入 0.1mL 試劑一，室溫放置 10min，4℃，12000rpm 離心 10min，取上清，然后取 20μL 測定蛋白含量，剩余的作為待測樣品。

二、測定步驟和操作表

三、計(jì)算公式

1、按蛋白濃度計(jì)算：

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/mg prot）=（OD₃₇₀ 測定管－OD₃₇₀ 空白管）÷（ε×d）×V÷(Cpr×V 樣品)

=（OD₃₇₀ 測定管－OD₃₇₀ 空白管）÷4.4÷Cpr；

2、按樣本鮮重計(jì)算：

蛋白質(zhì)羰基含量（μmol/g 鮮重）=（OD₃₇₀ 測定管－OD₃₇₀ 空白管）÷（ε×d）×V÷(W×V 樣品÷V 提取)

=（OD₃₇₀ 測定管－OD₃₇₀ 空白管）÷4÷W

ε：蛋白質(zhì)羰基消光系數(shù)，22 mL?μmol-1?cm-1；d：比色皿光徑，1cm；V：加入試劑六體積，1mL； V 樣品：加入樣本體積，0.2 mL； V 提?。杭尤胩崛∫杭霸噭┮惑w積，1.1mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL。W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、試劑一使用之前根據(jù)要測定的樣品數(shù)現(xiàn)配，配置好后 4℃保存，若變?yōu)楹谏瑒t不能使用。

2、試劑二見光易分解，反應(yīng)需嚴(yán)格避光。