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α-淀粉酶 ( α-AL）試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-084

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

淀粉酶負責(zé)水解淀粉，包括 α-淀粉酶和 β-淀粉酶。α-淀粉酶(EC 3.2.1.1)可隨機地作用于淀粉 中的 α-1,4-糖苷鍵，生成葡萄糖、麥芽糖、麥芽三糖、糊精等還原糖， 同時使淀粉的粘度降 低，因此又稱為液化酶。

測定原理：

還原糖還原3,5-二硝基水楊酸生成棕紅色物質(zhì) 。β-淀粉酶不耐熱，在 70℃鈍化 15min，從而 測定 α-淀粉酶活性。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、恒溫水浴鍋、臺式離心機、可調(diào)式移液器、玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一 ：25mL×1 瓶，常溫保存，若有黃色晶體析出，需 90℃加熱溶解后再用；

試劑二：20mL×1 瓶，4℃保存 ，若有沉淀析出，需 70℃加熱溶解后再用。

粗酶液提?。?/span>

組織： 稱取 0.1~0.2g 樣本（建議稱取約 0.1g 樣本），加 1 mL 蒸餾水勻漿；將勻漿倒入離心 管中，在室溫下放置提取 15min，每隔 5min 振蕩 1 次，使其充分提??；3000g，25℃離心

10min，吸取上清液并且加蒸餾水定容至 10 mL，搖勻，即為淀粉酶原液。 

血清（漿）： 直接檢測。

操作步驟和加樣表（在 1.5mLEP 管中依次加入下列試劑）：

1、分光光度計預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長到 540 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、試劑一或試劑二 40℃預(yù)熱 10min

3、測定步驟

70℃水浴 15min 左右 ，冷卻

在 40℃恒溫水浴中準確保溫 5min

混勻，95℃水浴 5min，冷卻 ，  540nm 處讀取對照管和測定管吸光度 ，計算 ΔA=A 測定管-A 對照管。

α-淀粉酶活性計算：

1、標準條件下測定回歸曲線為 y=3.7215x -0.1778； x 為標準品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、α-淀粉酶活性

（1）按照樣本質(zhì)量計算

單位定義：每 g 組織每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活力單位。

α-淀粉酶活性 (mg/min/g 鮮重 )=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總 ]÷(W×V 樣 ÷V 樣總)÷T

= 1.075×(ΔA＋0.1778)÷W

（2）按照蛋白質(zhì)含量計算

單位定義：每 mg 組織蛋白每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α-淀粉酶活性(mg/min/mg prot)=[(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷（V 樣×Cpr）÷T

=0.1075× (ΔA＋0.1778) ÷Cpr

（3）血清（漿）樣本中 α-淀粉酶活性計算

單位定義：每 mL 血清（漿）每分鐘催化產(chǎn)生 1mg 還原糖定義為 1 個酶活性單位。

α-淀粉酶活性(mg/min/mL)= [(ΔA＋0.1778)÷3.7215×V 反總]÷V 樣÷T

=0.1075×(ΔA＋0.1778)

V 反總：反應(yīng)體系總體積，0.5mL；V 樣：加入反應(yīng)體系中樣本體積，0.25 mL；V 樣總：提 取液總體積， 10 mL；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度， mg/mL；W：樣本質(zhì)量， g；T：反應(yīng)時間， 5min。