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游離脂肪酸（FFA）含量試劑盒(測植物組織)(分光光度法)

注意事項(xiàng)：本試劑盒用于測定植物組織樣品，如需測定血清、動物組織、微生物、細(xì)胞等樣品，請查詢貨號 LE-1-061/LE-2-061

貨號：LE-1-137

正式測定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

FFA 既是脂肪水解的產(chǎn)物，又是脂肪合成的底物。FFA 的濃度與脂類代謝、糖代謝、內(nèi)分泌功能有關(guān)， 也可反映食物貯藏中的品質(zhì)變化。

測定原理：

在弱酸性條件下，FFA 與銅鹽反應(yīng)生成銅皂，在 715nm 處有特征吸收峰，在一定范圍內(nèi)游離脂肪酸含 量與顯色程度呈線性關(guān)系。

試劑組成和配置：

試劑一 ：液體 60 ml ×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 25 ml ×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 25 ml ×1 瓶，4℃保存。

自備儀器和用品：

研缽、 臺式離心機(jī)、震蕩儀、可見分光光度計(jì)、1ml 玻璃比色皿。

樣品中 FFA 提?。?/span>

組織用蒸餾水沖洗干凈后，用吸水紙吸取表面水分，搗碎后按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(ml)為 1：5~ 12 的比例（建議稱取約 0. 1g 組織，加入 1.2ml 試劑一）加入試劑一 ，震蕩提取 3h，8000g，4℃離心 10min， 取上清液待測。

測定操作：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 715 nm。

2、對照管：取上清液 1ml，加 0.5ml 試劑二，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8ml 于 1ml 玻璃比 色皿，調(diào)零。

3、測定管：取上清液 1ml，加 0.5ml 試劑三，充分震蕩 5min，室溫靜置 5min，取上層 0.8ml 于 1ml 玻璃比 色皿，測定吸光值，記為 A。

注意 ：對照管每個(gè)樣品都需要測定一次。

FFA 含量計(jì)算公式：

標(biāo)準(zhǔn)曲線：y=0.0075 x+ 0.0055，R²=0.994

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算

FFA（nmol/mg prot）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1×Cpr)

=133×(A-0.0055)÷Cpr

2、按樣本質(zhì)量計(jì)算

FFA（nmol/g  鮮重）= (A-0.0055)÷0.0075×V1÷(V1÷V2×W)

=160×(A-0.0055)÷W

V1：加入樣本體積， 1ml；V2：提取液體積， 1.2ml；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣品質(zhì)量，g。

注意事項(xiàng)：

1、蛋白含量不可直接用提取的上清液直接測定，可用蒸餾水或緩沖液或生理鹽水選用本公司的 BCA 法蛋白含量測定試劑盒。

2、試劑盒最低檢出限為 2 nmol/ml。