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貨號：LE-1-292

測定意義：

蔗糖轉(zhuǎn)化酶(Invertase，Ivr) 催化蔗糖不可逆地分解為果糖和葡萄糖，是高等植物蔗糖 代謝關鍵酶之一。根據(jù)最適 pH ，Ivr 分為酸性轉(zhuǎn)化酶(AI) 和中性轉(zhuǎn)化酶(NI) 兩種類型。

AI 的最適 pH 為 3~5 。AI 分為可溶性 AI(S-AI)和細胞壁不溶性 AI (B-AI)兩種類型。B-AI  存在于細胞間隙并結合在細胞壁上 ，主要參與韌皮部質(zhì)外體卸載時蔗糖的分解，以維持庫源之間蔗糖的濃度。

測定原理：

B-AI 催化蔗糖降解產(chǎn)生還原糖，進一步與 3,5－二硝基水楊酸反應，生成棕紅色氨基化合物， 在 510nm 有特征光吸收，在一定范圍內(nèi)510nm 光吸收增加速率與 B-AI 活性成正比。

自備用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、移液器、  1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

提取液 1：液體 50mL×1 瓶，  4℃保存;

提取液 2：液體 50mL×1 瓶，  4℃保存;

試劑一：液體 50mL×1 瓶，  4℃保存;

試劑二：粉劑 ×1 瓶，  4℃保存；臨用前加入 25mL 試劑一充分溶解備用；用不完的試劑 4℃ 保存;

試劑三：液體 30mL×1 瓶，  4℃保存；

粗酶液提?。?/span>

按照組織質(zhì)量(g)：提取液 1 體積(mL)為 1：5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 提取液 1)，進行冰浴勻漿。12000g 4℃離心 10min，  棄上清，  沉淀中加入 1mL 蒸餾水，充 分震蕩混勻，12000g 4℃離心 10min，棄上清，沉淀中加入 1mL 提取液 2  充分混勻，4℃浸提過夜，12000g 4℃離心 20min，取上清置冰上待測 。

測定步驟和加樣表：

混勻，37℃準確水浴 30min 后 ，95℃水浴 10min (蓋緊，  以防水分散失)，流水冷卻后充分混勻(以保證濃度不變)

混勻，95℃水浴 10min  (蓋緊，以防止水分散失)，流水冷卻后充分混勻，510nm 處，蒸餾水調(diào)零， 記錄各管吸光值 A，如果吸光值大于 2，可以用蒸餾水稀釋后測定(計算公式中乘以相應稀釋倍數(shù))，ΔA=A 測定-A 對照。

B-AI 活性計算：

標準條件下測定的回歸方程為 y = 0.0016x -0.001 ；x 為標準品濃度(μg/mL)，  y 為吸光值。

1、按蛋白濃度計算：

單位的定義：37℃每 mg 蛋白每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

B-AI 活性 (μg/min/mg prot)＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(V1 ×Cpr )÷T

=20.8 ×(ΔA +0.001) ÷Cpr

2、按鮮重計算：

單位的定義：37℃每 g 組織每分鐘產(chǎn)生 1μg 還原糖定義為一個酶活性單位。

B-AI 活性 (μg/min/g 鮮重)  ＝[(ΔA +0.001) ÷0.0016×V1]÷(W ×V1÷V2) ÷T

=20.8 ×(ΔA +0.001)÷W

V1：加入反應體系中樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1mL；T：反應時間，30min；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。