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銅藍蛋白(Ceruloplasmin ，Cp)測定試劑盒說明書(微量法)

貨號：LE-2-171

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

銅藍蛋白是血漿的含銅蛋白，有運輸銅的功能，同時具有氧化酶的活性，是細胞外液重要的抗氧化劑。

測定原理：

銅藍蛋白催化 3,3’,5,5’-四甲基聯(lián)苯胺生成藍色產(chǎn)物，在 645nm處有特征吸收峰，依此可得銅藍蛋白活性。

試劑組成和配制:

試劑一：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 7mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：液體 15mL×1 瓶，4℃避光保存。（使用前 37℃預(yù)熱）

自備儀器和用品：

天平 、可見分光光度計/酶標儀 、微量石英比色皿/96 孔板和蒸餾水。

測定操作表

1、分光光度計/酶標儀預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長至 645nm，蒸餾水調(diào)零。

2、操作表

計算公式:

a.   用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、按體積計算

酶活定義:37℃條件下，每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高 0.01 為一個酶活單位。 

Cp 活力（U/ml）=ΔA×V 反總÷0.01÷V 樣÷T

= 33.33×ΔA

2、按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高 0.01 為一個酶活單位。 

Cp 活力（U/g 鮮重）=ΔA×V 反總÷0.01÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T

= 33.33×ΔA÷W

3、按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高 0.01 為一個酶活單位。 

Cp 活力（U/ mg prot）=ΔA×V 反總÷0.01÷（ Cpr×V 樣）÷T

= 33.33×ΔA÷Cpr

V 樣：0.03 ml；V 反總：0.3 ml；T：反應(yīng)時間，30min；V 樣總：加入提取液體積，1ml；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

b.  用微量石英比色皿測定的計算公式如下

1、按體積計算

酶活定義:37℃條件下，  每分鐘每毫升樣品與底物作用吸光度升高 0.005 為一個酶活單位。 

Cp 活力（U/ml）=ΔA×V 反總÷0.005÷V 樣÷T

= 66.66×ΔA

2、按鮮重計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每克樣品與底物作用吸光值升高 0.005 為一個酶活單位。

Cp 活力（U/g 鮮重）=ΔA×V 反總÷0.005÷（W ×V 樣÷V 樣總）÷T

= 66.66×ΔA÷W

3、按蛋白濃度計算

單位定義：37℃條件下，每分鐘每毫克蛋白樣品與底物作用吸光值升高 0.005 為一個酶活單位。 

Cp 活力（U/ mg prot）=ΔA×V 反總÷0.005÷（ Cpr×V 樣）÷T

= 66.66×ΔA÷Cpr

V 樣：0.03 ml；V 反總：0.3 ml；T：反應(yīng)時間，30min；V 樣總：加入提取液體積，1ml；  Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g

注意事項:

試劑二和試劑三有一定的毒性和刺激性，請操作時做好防護措施。