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單寧含量試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-176

正式測定前取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定

測定意義：

單寧是一類廣泛存在于植物體內的多元酚化合物，又稱植物多酚。具有獨特的化學性質和多種生理活性， 如能與蛋白質、生物堿、多糖結合；能與多種金屬離子發(fā)生絡合或靜電作用；具有止血、抑制微生物、抗 過敏、抗突變、抗腫瘤、抗衰老等生理活性。

測定原理：

單寧在堿性環(huán)境下與磷鉬酸反應，生成藍色化合物，在 760nm 處有最大吸收峰。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計、水浴鍋、可調式移液器、 1mL 玻璃比色皿、研缽和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：液體 10 mL× 1 瓶，4℃保存； 

試劑二：液體 8 mL× 1 瓶，4℃保存；

單寧的提?。?/span>

按照組織質量（g）：蒸餾水體積(mL)為 1： 5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織，加入 1mL 蒸餾水）， 充分 勻漿后轉移到 EP 管中，80℃水浴提取 30min，  8000 g，25℃離心 10 min，取上清液待測。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長至 760nm，蒸餾水調零；試劑一和試劑二 37℃預熱 10min 以上；

2、操作表：

混勻，室溫靜置 5min

混勻，室溫靜置 30min，760nm 處讀取吸光值 A ，ΔA=A 測定-A 對照，對照管只要做一管。

單寧含量計算：

1、標準條件下測定的回歸方程為 y = 1.6418x +0.0134；x 為標準品濃度(mg/mL) ，y 為ΔA(A 測定-A 對照)。

2、按樣本鮮重計算：

單寧含量（ mg /g 鮮重）= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷（W×V1÷V2）

=0.609×(ΔA-0.0134) ÷W。

3、按樣本蛋白濃度計算：

單寧含量(mg/mg prot)= [(ΔA-0.0134) ÷1.6418×V1]÷(V1×Cpr)

=0.609×(ΔA-0.0134) ÷Cpr。

V1 ：加入樣本體積，0.025mL；V2 ：加入提取液體積， 1mL； Cpr：樣本蛋白質濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：

1、ΔA 控制在 0.02-0.8 范圍內，若 ΔA 大于 0.8，將樣本提取上清液用蒸餾水稀釋 10 倍后檢測，計算公式 中乘以相應稀釋倍數(shù)。

2、標準曲線線性范圍為：0.025mg/mL-0.5mg/mL。