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植物可溶性糖含量試劑盒說(shuō)明書(分光光度法)

貨號(hào)：LE-1-099

正式測(cè)定前務(wù)必取 2-3 個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測(cè)定

測(cè)定意義：

糖類物質(zhì)是構(gòu)成植物體的重要組成成分之一，也是新陳代謝的主要原料和貯存物質(zhì)。可溶性 糖是指樣品中的還原單糖及在本法測(cè)定條件下能水解成還原單糖的蔗糖、麥芽糖和可部分水 解為葡萄糖的淀粉。

測(cè)定原理：

蒽酮比色法?？捎糜诳扇苄詥翁?、寡糖和多糖的含量測(cè)定，具有靈敏度高﹑簡(jiǎn)便快捷﹑適用 于微量樣品的測(cè)定等優(yōu)點(diǎn)。

需自備的儀器和用品：

可見分光光度計(jì)、沸水浴、可調(diào)式移液器、1mL 玻璃比色皿、濃硫酸（不允許快遞）研缽、 和蒸餾水。

試劑的組成和配制：

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃避光保存； 

試劑二：8mL×1 瓶 ，4℃保存；

樣品中可溶性糖的提?。?/span>

稱取 0. 1~0.2g 樣本，加入 1mL 蒸餾水研磨成勻漿，倒入有蓋離心管中，95℃水浴 10min（蓋 緊，以防止水分散失），冷卻后，8000g，25℃離心 10min ，取 0. 1mL 上清液于新的 EP 管中， 加入 0.9mL 蒸餾水，搖勻待測(cè)。

測(cè)定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min 以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)至 620nm ，蒸餾水調(diào)零。

2、調(diào)節(jié)水浴鍋至 95 度。

3、工作液的配制：在試劑一中加入 6mL 試劑二，充分溶解，如較難溶解，可加熱攪拌；用 不完的試劑 4℃保存一周；

4、加樣表（在 EP 管中反應(yīng)）：

混勻，置 95 度水浴中 10min（蓋緊， 以防止水分散失），冷卻至室溫后，于 620nm 處，分 別讀取空白管和測(cè)定管吸光值，ΔA=A 測(cè)定管-A 空白管。

注意：

1、空白管只要做一管。

2、如果ΔA 大于 1 ，需將樣本用蒸餾水再稀釋（注意：樣本前處理中已稀釋 10 倍）。 計(jì)算公式中乘以相應(yīng)的稀釋倍數(shù)。

3、于濃硫酸具有強(qiáng)腐蝕性，請(qǐng)謹(jǐn)慎操作。

可溶性糖含量計(jì)算：

1、標(biāo)準(zhǔn)條件下測(cè)定的回歸方程為 y = 8.55x - 0.07；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（mg/mL），y 為吸光值。

2、按樣本鮮重計(jì)算：

可溶性糖（mg /g 鮮重）= [(ΔA＋0.07) ÷8.55×V1]÷（W×V1÷V2）×F

= 1. 17×(ΔA＋0.07) ÷W。

3、按樣本蛋白濃度計(jì)算：

可溶性糖（mg /mg prot）=[ (ΔA＋0.07) ÷8.55×V1]÷(V1×Cpr)

=0.117×(ΔA＋0.07) ÷Cpr。

V1：加入樣本體積，0.2mL；V2：加入提取液體積，1mL；F ：稀釋倍數(shù)，10； Cpr：樣本 蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本鮮重，g。

注意：最低檢測(cè)限為 1mg/g 鮮重或 10ng/ mg prot