伊人久久大香线焦|久久青青草国产第一页|亚洲国产九九九热视频|超乳视频爆乳无码免费专区|欧美日韩亚洲视频一区二区|少妇高潮惨叫喷水在线观看|亚洲区欧美区偷拍区中文字幕|国产日韩一区二区三区在线观看

尿苷二磷酸葡萄糖焦磷酸化酶（UGP）試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-355

正式測定前務(wù)必取 2-3 個預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

測定意義：

UDPG 焦磷酸化酶是生物體糖原合成過程中的關(guān)鍵酶 。在葡萄糖合成糖原前催化葡萄糖活化，將 1- 磷酸葡萄糖與 UTP 分子合成為 UDP-葡萄糖（UDPG）。

測定原理：

UGP 可逆催化反應(yīng)生成 1 磷酸葡萄糖，在磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶作用下將 NADP 轉(zhuǎn)化為 NADPH，340nm 的吸光值增加速率反映了UGP 活性。

試劑組成和配制

提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 5mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑三：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 5mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑四：粉劑×1 瓶，-20℃保存。臨用前加 5mL 蒸餾水充分溶解；用不完的試劑分裝后-20℃ 保存，禁止反復(fù)凍融。

試劑五：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

自備儀器和用品：

天平 、低溫離心機 、研缽 、紫外分光光度計 、 1 ml 石英比色皿。

酶液提?。?/span>

1、組織：按照質(zhì)量（g） ：提取液體積(ml)為 1 ：5~ 10 的比例（建議稱取約 0. 1g，加入 1ml 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于 4℃, 10000g 離心 10min，取上清置冰上待測。

2、細胞：按照細胞數(shù)量（ 10⁴ 個） ：提取液體積（ml） 為 500~ 1000：1 的比例（建議 500 萬細胞加入 1ml 提取液），冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒，總時間 3min）；然后 4℃,  10000g 離心 10min，取上清置冰上待測。

3、液體：直接檢測。

測定操作：

1、分光光度計預(yù)熱 30min，調(diào)節(jié)波長至 340nm，蒸餾水調(diào)零。

2、取 1ml 石英比色皿，依次加入 500μl 試劑一 ， 100μl 試劑二， 100μl 試劑三， 100μl 試劑四，100μl 試劑五 ，100μl 粗酶液，充分混勻，記錄 340nm 處 30s 的吸光值 A1 和 330s 的吸光值 A2，△A=A2-A1

計算公式：

1、按照樣本蛋白濃度計算

酶活單位定義：每毫克組織蛋白每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /mg prot）＝[ΔA÷ (ε×d）×V 反總×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=321.54×ΔA÷Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計算

酶活單位定義：每克組織每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。

UGP（nmol/min /g 鮮重）＝[ΔA÷ (ε×d）×V 反總×109]÷(W ×V 樣÷V 樣總) ÷T

=321.54×ΔA÷W

3、按照細胞數(shù)量計算

酶活單位定義：每 10⁴ 個細胞每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。 

UGP（nmol/min /10⁴ cell）= [ΔA÷ (ε×d）×V 反總×10⁹]÷(500×V 樣÷V 樣總)÷T

=0.643×ΔA

4、按照液體體積計算

酶活單位定義：每毫升液體每分鐘消耗 1 nmol 的 NADP 定義為一個酶活力單位。UGP（nmol/min/ml）＝[ΔA÷ (ε×d）×V 反總×10⁹]÷V 樣÷T

=321.54×ΔA

V 反總：反應(yīng)體系總體積， 1×10^-3 L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³ L / mol /cm；d： 比色皿光徑，  1cm；V 樣：加入樣本體積，0. 1ml；V 樣總：加入提取液體積，1ml；T：反應(yīng)時間，5 min；Cpr：樣本蛋 白質(zhì)濃度，mg/ml；W：樣本質(zhì)量，g  ；500：細胞或細菌總數(shù)，500 萬。