伊人久久大香线焦|久久青青草国产第一页|亚洲国产九九九热视频|超乳视频爆乳无码免费专区|欧美日韩亚洲视频一区二区|少妇高潮惨叫喷水在线观看|亚洲区欧美区偷拍区中文字幕|国产日韩一区二区三区在线观看

糖原磷酸化酶 a（GPa）試劑盒說明書(分光光度法)

貨號：LE-1-353

正式測定前務(wù)必取2-3個(gè)預(yù)期差異較大的樣本做預(yù)測定

產(chǎn)品內(nèi)容：

提取液：60mL×1 瓶，4℃保存；

試劑一：液體 40mL×1 瓶，4℃保存；

試劑二：粉劑×1 瓶，-20℃保存；

試劑三：粉劑×1 支，-20℃保存；

試劑四：粉劑×1  支，-20℃保存；

產(chǎn)品說明：

糖原磷酸化酶（Glycogen phosphorylase，GP，EC 2.4.1.1）是糖原分解代謝的關(guān)鍵酶，使糖原分子從非還原端逐個(gè)斷開α-1，4-糖苷鍵移去葡萄糖基，釋放1-磷酸葡萄糖，直至臨近糖原分子α-1，6- 糖苷鍵分支點(diǎn)前4個(gè)葡萄糖基處。GP分為有活性的糖原磷酸化酶 a（GPa）和無活性的糖原磷酸化酶b（GPb）兩種形式。糖原的分解主要在 GPa 的催化下進(jìn)行。

未添加激活劑時(shí)，GPa 催化糖原和無機(jī)磷產(chǎn)生葡萄糖殘基生成糖原和1-磷酸葡萄糖，磷酸葡萄糖變位酶和6-磷酸葡萄糖脫氫酶進(jìn)一步依次催化NADP還原生成NADPH，在340nm下測定 NADPH上升速率，即可反映GPa活性。

需自備的儀器和用品：

紫外分光光度計(jì)、臺式離心機(jī)、可調(diào)式移液器、1 mL石英比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

操作步驟：

一、樣本的前處理：

按照組織質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約0.1g組織，加入1mL提取液），進(jìn)行冰浴勻漿。8000g 4℃離心10min，取上清，置冰上待測。

二、測定步驟：

1、分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長至340nm，蒸餾水調(diào)零；

2、工作液的配制：臨用前將試劑二轉(zhuǎn)移到試劑一中混合溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃  保存，禁止反復(fù)凍融。

3、試劑三的配制：臨用前在試劑三瓶中加入2.5mL蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

4、試劑四的配制：臨用前在試劑四瓶中加入 2.5mL 蒸餾水充分溶解待用；用不完的試劑分裝后-20℃保存，禁止反復(fù)凍融。

5、將工作液、試劑三和試劑四置于 37℃預(yù)熱5分鐘；

6、在1mL石英比色皿中加入50μL樣本、50μL試劑三、50μL試劑四、50μL蒸餾水和800μL工作液，立即混勻，記錄340nm處5min后的A1和10min后的吸光值A(chǔ)2，計(jì)算ΔA=A2-A1。

三、GPa 活性計(jì)算：

1、按樣本蛋白濃度計(jì)算

單位定義：每mg組織蛋白每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GPa（nmol/min/mg prot）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(V 樣×Cpr) ÷T

=643×ΔA÷Cpr

2、按樣本鮮重計(jì)算

單位定義：每g組織每分鐘產(chǎn)生1nmol NADPH定義為一個(gè)酶活力單位。

GPa（nmol/min/g 鮮重）＝[ΔA×V 反總÷（ε×d）×10⁹]÷(W ×V 樣÷V 樣總)÷T

=643×ΔA÷W

V 反總：反應(yīng)體系總體積，1×10^-3L；ε：NADPH 摩爾消光系數(shù)，6.22×10³L/mol/cm；d：比色皿光徑，1cm；V 樣：加入樣本體積，0.05 mL；V 樣總：加入提取液體積，1 mL；T：反應(yīng)時(shí)間，5 min； Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g。