產(chǎn)品名稱：植酸酶試劑盒
產(chǎn)品規(guī)格：50管/24樣,100管/48樣
產(chǎn)品貨號(hào)：LE-1-382,LE-2-382
產(chǎn)品報(bào)價(jià)：
免費(fèi)咨詢：0551-66107970
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貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
檢測(cè)方法 |
規(guī)格 |
售價(jià)（元） |
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LE-1-382 |
植酸酶測(cè)試盒 |
分光光度法 |
50管/24樣 |
540 |
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LE-2-382 |
植酸酶測(cè)試盒 |
微量法 |
100管/48樣 |
960 |
植酸酶（phytase）試劑盒說(shuō)明書(shū)（分光光度法）
貨號(hào)：LE-1-382
正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
測(cè)定意義
植酸酶（phytase）是催化植酸及其鹽類水解為肌醇與磷酸（鹽）的一類酶的總稱，屬磷酸單酯水解酶，它能將食品和飼料中植酸及其鹽轉(zhuǎn)化為可供有機(jī)體利用的有效磷，降低糞便中的磷含量，減輕對(duì)環(huán)境的污染，改善營(yíng)養(yǎng)成分的吸收和利用，因此具有極其廣泛的研究和應(yīng)用價(jià)值。
測(cè)定原理
植酸酶在一定溫度和 pH 值條件下，水解底物植酸鈉生成無(wú)機(jī)磷與肌醇衍生物，無(wú)機(jī)磷在酸性環(huán)境中與鉬酸銨顯色劑反應(yīng)生成藍(lán)色復(fù)合物，在 700nm 處有特征吸收峰，根據(jù) 700nm 處吸光值變化可計(jì)算得植酸酶活性。
自備實(shí)驗(yàn)用品及儀器
天平、低溫離心機(jī)、可見(jiàn)分光光度計(jì)、1 mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋，超聲溶解器，回旋式振蕩器。
試劑組成和配制
提取液：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。
緩沖液：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。
試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存，臨用前加緩沖液 10mL 配制，現(xiàn)用現(xiàn)配；用不完的試劑 4℃ 保存一個(gè)月。
試劑二：液體 25mL×1 瓶，4℃保存。
顯色劑：粉劑×6 瓶，4℃保存，臨用前根據(jù)用量每瓶加 1mL 雙蒸水溶解，再加 4mL 試劑二混勻。
樣本處理
1、酶制劑：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：500~1000 的比例（建議稱取約 0.001g，加入 1mL 提取液）加入提取液，在超聲波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振蕩器振蕩15min，待測(cè)。
2、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振蕩器振蕩 15min， 4℃，4000g 離心 10min，取上清待測(cè)。
3、飼料樣品：飼料烘干粉碎，過(guò) 40 目篩，按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）進(jìn)行冰浴勻漿，在超聲波溶解器上溶解 15min，再用回旋式振蕩器振蕩 15min，4℃，4000g 離心 10min，取上清待測(cè)。
4、培養(yǎng)液等液體樣品：混勻直接測(cè)定。
測(cè)定操作表
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對(duì)照管 |
測(cè)定管 |
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樣本（μL） |
100 |
100 |
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37℃溫育 5min |
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緩沖液（μL） |
400 |
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試劑一（μL） |
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400 |
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混勻，37℃溫育 30min |
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95℃，10min 終止反應(yīng)，冷卻至室溫 |
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顯色劑（μL） |
150 |
150 |
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混勻，37℃靜置 15min，10000g，室溫，離心 5min，取上清，蒸餾水調(diào)零，測(cè)定 700nm 處吸光值，△A=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一個(gè)對(duì)照管。 |
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酶活性計(jì)算公式
標(biāo)準(zhǔn)曲線：y = 0.2764x + 0.0082，R2 = 0.9998；x 為標(biāo)準(zhǔn)品濃度（μmol/mL），y 為吸光值。
1、按照蛋白濃度計(jì)算
酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每毫克蛋白每分鐘從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性（μmol/min/mg prot）=（△ A-0.0082）÷0.2764÷Cpr÷T
=0.1206×（△ A-0.0082）÷Cpr
2、按照樣本質(zhì)量計(jì)算
酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每克樣本每分鐘從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性（μmol/min /g 鮮重）=（△ A-0.0082）÷0.2764÷W÷T
=0.1206×（△ A-0.0082）÷W
3、培養(yǎng)液等液體樣品
酶活性定義：在 37℃，pH5.5 的條件下，每毫升液體每分鐘從 5mmol/L 的植酸鈉溶液中釋放出 1μmol 的無(wú)機(jī)磷為一個(gè)酶活力單位。
植酸酶活性（μmol/min /mL）=（△ A-0.0082）÷0.2764÷T
=0.1206×（△ A-0.0082）
Cpr：樣本蛋白含量，mg/mL；W：樣本質(zhì)量，g；T：反應(yīng)時(shí)間，30min。
注意事項(xiàng)
1、顯色劑需要臨用前根據(jù)用量配制，每一瓶是 10 個(gè)樣本的用量，新配制的顯色劑若有顏色則已經(jīng)污染或者試劑過(guò)期，應(yīng)放棄使用。
2、ΔA 線性范圍為 0.01-2。
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