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土壤酸性磷酸酶（S-ACP）活性檢測試劑盒說明書（可見分光光度法）

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體 21mL×1 瓶，4℃避光保存。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃保存。用前加 50mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三：液體 11mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：粉劑×1 支，4℃避光保存。臨用前加 1152μL 無水乙醇（自備），48 μL 蒸餾水充分溶解。（變褐色后不能再使用）

標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 瓶，0.5 μmol/mL 苯酚標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

產(chǎn)品說明：

土壤磷酸酶是一類催化土壤有機(jī)磷礦化的酶，其活性的高低直接影響著土壤中有機(jī)磷的分解轉(zhuǎn)化及其生物有效性，是評價(jià)土壤磷素生物轉(zhuǎn)化方向與強(qiáng)度的指標(biāo)。土壤磷酸酶受到土壤碳、氮含量、有效磷含量和pH 顯著影響，根據(jù)最適pH 范圍，通常分為酸性、中性和堿性三種類型。酸性環(huán)境中， S- ACP 催化磷酸苯二鈉水解生成苯酚和磷酸氫二鈉，通過測定酚的生成量即可計(jì)算出S-ACP 活性。

試驗(yàn)中所需的儀器和試劑：

可見分光光度計(jì)、1mL 玻璃比色皿、臺(tái)式離心機(jī)、37℃恒溫培養(yǎng)箱、分析天平、可調(diào)式移液器、冰、蒸餾水、乙醇和甲苯。

操作步驟：

一、粗酶液提?。?/span>

稱取風(fēng)干混勻土壤約 0.1g，加入0.05mL 甲苯（自備），輕搖15min；加0.4 mL 試劑一并且搖勻后，置于37℃恒溫培養(yǎng)箱，開始計(jì)時(shí)，催化反應(yīng) 24h；到時(shí)后迅速加入 1mL 試劑二充分混勻，以終止酶催化的反應(yīng)。8000rpm，25℃離心10min，取上清液置于冰上待測。

二、測定步驟：

1、可見分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min 以上，調(diào)節(jié)波長到 660 nm，蒸餾水調(diào)零。

2、空白管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 試劑一，200 μL 試劑三，20 μL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 730 μL，混勻后室溫靜置 30 min，于660 nm 測定吸光度，記為A 空白管。

3、標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL 玻璃比色皿，加入 50 μL 標(biāo)準(zhǔn)液，200 μL 試劑三，20 μL 試劑四，充分混勻， 顯色后再加蒸餾水 730 μL，混勻后室溫靜置 30 min，于660 nm 測定吸光度，記為A 標(biāo)準(zhǔn)管。

4、測定管：取1mL 玻璃比色皿，加入50 μL 上清液，200μL 試劑三，20 μL 試劑四，充分混勻，顯色后再加蒸餾水730 μL，混勻后室溫靜置 30 min，于660 nm 測定吸光度，記為A 測定管。

注意：空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

三、S-ACP 活性計(jì)算：

活性單位定義：37℃中每克土壤每天釋放 1nmol 酚為 1 個(gè)酶活單位。

S-ACP（nmol/d/g）=[C標(biāo)準(zhǔn)液×(A測定管－A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管－A空白管)]×V總×1000÷W÷T

=725×(A 測定管－A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管－A 空白管)÷W

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.5 μ mol/mL； V 總：催化體系總體積，1.45mL；W：土壤樣品質(zhì)量，g；T：催化反應(yīng)時(shí)間，24 h=1 d；1000：單位換算系數(shù)，1μmol=1000nmol。

注：線性范圍為 0.03125μmol/mL-1.5μmol/m