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土壤汞( S-Hg)濃度檢測試劑盒說明書（可見分光光度法）

測定意義:

土壤汞污染能夠通過食物鏈傳遞和富集，對植物、動(dòng)物和人類健康產(chǎn)生威脅。礦山開發(fā)、工業(yè)加工、農(nóng)業(yè)生產(chǎn)和生活垃圾常常造成土壤汞污染，因此評價(jià)和防止土壤重金屬污染常常需 要測定土壤汞含量。

測定原理:

土壤經(jīng)消化后，汞以 Hg²⁺離子形式存在; Hg²⁺ 能與二硫腙生成橙色絡(luò)合物，溶于三氯甲烷后，在 490nm 測定吸光度， 即可計(jì)算 S-Hg 含量。 

自備儀器和用品:

可見分光光度計(jì)、 1mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋、可調(diào)式移液槍、 100目篩(可更小)、濃硫酸、濃鹽酸、濃硝酸、三氯甲烷和蒸餾水。

試劑組成和配制:

標(biāo)準(zhǔn)品: 液體×1支，4 n mol/mL Hg 標(biāo)準(zhǔn)液，4℃保存。

試劑一:  自備 。提供 50mL 空試劑瓶。在該試劑瓶中加入26 mL蒸餾水， 18mL濃鹽酸，6 mL 濃硝酸，混勻，4℃避光保存。

試劑二: 粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加 46 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑三: 粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加5.5 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑四: 粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加 2.6 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑五: 粉劑×1瓶，4℃保存。臨用前加 13 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑六: 粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加 50 mL 三氯甲烷充分溶解。

S-Hg 測定操作:

1、 分光光度計(jì)預(yù)熱 30 min，調(diào)節(jié)波長到 490 nm，三氯甲烷調(diào)零。

2、 樣品管: 風(fēng)干的土壤，過 100  目篩后精確稱取 0.1 g 左右，裝入 EP 管;  加入 1 mL 試劑 一，充分混勻后沸水浴消化 60 min。取出冷卻后室溫 8000g 離心 10min ， 吸取 100 μL 上清液加入新的 EP 管(≥2.5 mL); 再先后加入 900 μ L 蒸餾水和 100 μ L 濃硫酸，混勻; 最后加入 9 00 μ L 試劑二，混勻后 40℃水浴 24h ，期間震蕩數(shù)次。

3、 標(biāo)準(zhǔn)管: 取 EP 管，加入 100 μ L 標(biāo)準(zhǔn)液，900 μ L 蒸餾水和 100 μ L 濃硫酸，混勻;  最 后加入 900 μ L 試劑二，混勻后 40℃水浴 24h ，期間震蕩數(shù)次。

4、  于樣品管和標(biāo)準(zhǔn)管分別加入 100  μ L 試劑三，震蕩至無色; 開蓋靜置 30min，期間搖蕩 數(shù)次， 以排出氣體。

5、  加入 50 μ L 試劑四，充分混勻后靜置 5min; 加入 250μL 試劑五，蓋緊后震蕩至少 1min， 靜置 10min 以分層。

6、  小心吸取 100 μ L 下層溶液，加入 1mL 試劑六，震蕩使無色，靜置 10 min 以分層。

7、  小心吸取 700 μ L 下層溶液，加入 1mL 玻璃比色皿，于 490nm 處比色，記錄各管吸光值。 分別記為 A 樣品管和 A 標(biāo)準(zhǔn)管。

注意: 標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次。

S-Hg 濃度計(jì)算公式:

S-Hg  ( nmol Hg/g)  = [C 標(biāo)×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管]×V 總÷V 樣÷W 

= 40×A 測定管÷A 標(biāo)準(zhǔn)管÷W

C 標(biāo): 標(biāo)準(zhǔn)液濃度，4 n mol/mL Hg; V 總: 上清液總體積，1 mL; W: 土樣質(zhì)量，g; V 樣:加入上清液體積， 100 μ L=0.1 mL。

注意事項(xiàng):

1、試劑一有刺激性氣味， 易揮發(fā)，實(shí)驗(yàn)過程中應(yīng)注意佩戴口罩和手套，使用完立即蓋好蓋 子， 以免試劑不夠;

2、測定過程中需加入濃硫酸，加濃硫酸時(shí)需注意，避免濺到皮膚或眼睛上;

3、靜置分層后，用 1mL 移液槍，排除空氣后，輕輕插入下層溶液中，緩慢吸取下層溶液。