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正式測(cè)定之前選擇2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。

產(chǎn)品內(nèi)容：

試劑一：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前配制，依次加入22 mL蒸餾水充分溶解，再加入試劑二，充分混合。

標(biāo)準(zhǔn)液：液體×1 支，0.02 mmol/L無(wú)機(jī)磷，4℃保存。

產(chǎn)品說(shuō)明：

血磷主要指血中的無(wú)機(jī)磷鹽以無(wú)機(jī)磷鹽的形式存在。血漿中鈣、磷濃度關(guān)系密切。在以mg/dL表示時(shí)，兩者的乘積(［Ca］×［P］)為30～40。當(dāng)(［Ca］×［P］)>40，則鈣和磷以骨鹽形式沉積于骨組織。若(［Ca］×［P］)<35 則妨礙骨的鈣化，甚至可使骨鹽溶解，影響成骨作用。血鈣和血磷含量的相對(duì)穩(wěn)定依賴于鈣、磷的吸收與排泄和鈣化及脫鈣兩種代謝的相對(duì)平衡。上述平衡受到維生素D3、甲狀旁腺素和降鈣素等激素的調(diào)節(jié)。

去除血清中有機(jī)磷后，無(wú)機(jī)磷鹽與鉬酸銨試劑生成磷鉬酸，被硫酸亞鐵還原后呈藍(lán)色。在620nm 有光吸收；通過(guò)測(cè)定620 nm吸光度，計(jì)算血液中磷含量。

自備儀器和用品：

可見(jiàn)分光光度計(jì)、離心機(jī)、可調(diào)式移液槍、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。

操作步驟：

一、血磷濃度測(cè)定操作：

1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上，調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到620 nm，蒸餾水調(diào)零。

2. 取出標(biāo)準(zhǔn)液，室溫解凍。

3. 血清預(yù)處理：吸取50 μL血清，加950μL試劑一，混勻后室溫8000rpm，離心10min，取上清液，待測(cè)。

4. 空白管：取1mL玻璃比色皿，依次加入250μL 蒸餾水，250μL試劑一，500μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm 測(cè)定吸光度記為A空白管。

5. 標(biāo)準(zhǔn)管：取1mL玻璃比色皿，依次加入250μL 標(biāo)準(zhǔn)液，250μL試劑一，500μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm 測(cè)定吸光度記為A標(biāo)準(zhǔn)管。

6. 測(cè)定管：取1mL玻璃比色皿，依次加入250μL 上清液，250μL試劑一，500μL試劑三，混勻后靜置10min，于620 nm 測(cè)定吸光度記為A測(cè)定管。

二、血磷濃度計(jì)算：

血磷含量（m mol/dL）=[C標(biāo)準(zhǔn)液平×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)]×樣品稀釋倍數(shù)×V樣總=0.04×(A測(cè)定管-A空白管)÷(A標(biāo)準(zhǔn)管-A空白管)

C 標(biāo)準(zhǔn)液：0.02 mmol/L；樣品稀釋倍數(shù)：（50 μL血清+950μL試劑一）÷50 μL 血清=20：V樣總：100 mL=0.1 L。

注意事項(xiàng)：

1、試劑三需臨用前配制，如未用完，4℃保存，最多可使用3 天。

2、測(cè)定過(guò)程中，應(yīng)盡量避免溶血，因?yàn)榧t細(xì)胞中有機(jī)磷酯進(jìn)入血清后可被酶水解而使得血清無(wú)機(jī)磷含量增高。