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酸性蛋白酶（ACP）活性檢測試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-359

正式測定前務必取 2-3 個預期差異較大的樣本做預測定。

產品內容：

提取液：液體 35mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：粉劑×1 瓶，4℃保存。臨用前加 10 mL 蒸餾水溶解。

試劑二：粉劑×1 瓶，4℃避光保存。臨用前加入 10 mL 提取液，沸水浴中磁力攪拌溶解。

試劑三：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑四：液體 10mL×1 瓶，4℃保存。

標準品：液體 1mL×1 支，0.25 μ mol/mL 標準酪氨酸溶液，4℃保存。

產品說明：

ACP 是一種在酸性環(huán)境下催化蛋白質水解的酶。該酶主要用于酒精發(fā)酵、啤酒釀造、毛皮軟化、果酒澄清、醬油釀造、飼料等。

酸性條件下，ACP 催化酪蛋白水解產生酪氨酸；在堿性條件下，酪氨酸還原磷鉬酸化合物生成鎢藍；鎢藍在 680nm 有特征吸收峰，通過測定其吸光度增加，來計算 ACP 活性。

試驗所需自備儀器和樣品：

研缽、臺式離心機、可見分光光度計、水浴鍋、磁力攪拌器、可調式移液槍、1mL 玻璃比色皿、1.5 mL EP 管和蒸餾水。

操作步驟：

一、粗酶液提取：

稱約 0.1g 組織，加入 1mL 提取液，冰上充分研磨，10000rpm 4℃離心 10min，取上清，即粗酶液，置冰上待測?；蛑苯臃Q取 0.1g 酶制品，加入 1mL 提取液，置冰上待測。

二、測定：

1、分光光度計預熱 30min 以上，調節(jié)波長到 680 nm，蒸餾水調零。

2、試劑一、試劑二和試劑三置于 30℃水浴保溫 30min 以上。

3、樣本測定（在 1.5mLEP 管中依次加入下列試劑）

取 1mL 于 1mL 玻璃比色皿中，在 680nm 測定光吸收，分別記為 A 對照管、A 測定管、A 空白管、A 標準管。

三、酸性蛋白酶活性計算：

1、按蛋白濃度計算

ACP 活性單位（U）定義：30℃每毫克蛋白每分鐘催化水解產生 1μmol 酪氨酸。

ACP 活性（U/mg prot）

=C 標準品×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空白管）×V1÷（Cpr×V2）÷T

=0.125×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空白管）÷Cpr

2、按樣本鮮重計算

AP 活性單位（U）定義：30℃每克樣品每分鐘催化水解產生 1 μ mol 酪氨酸。

AP 活性（U/g）

=C 標準品×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空白管）×V1÷（W×V2÷V3）÷T

=0.125×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空白管）÷W

C 標準品：0.25 μ mol/mL 標準酪氨酸溶液； Cpr：粗酶液蛋白質濃度（mg/mL）；W：樣品質量（g）；V1：酶促反應總體積（mL），0.5mL；V2：加入反應體系中粗酶液體積（mL），0.1 mL； V3：粗酶液總體積（mL），1mL；T：催化反應時間（min），10min。

注意：

若反應較弱，（A 測定管－A 對照管）差值較小，可適當延長反應時間（20-30min），即第一步水浴時間，最后計算酶活時對公式進行修改。