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貨號：LE-1-356

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義：

胃蛋白酶由胃粘膜主細胞分泌，分解食物中蛋白質成小肽段。一般用于神經(jīng)性低酸癥的鑒別，慢性胃炎、慢性胃擴張、慢性十二指腸炎等癥狀時也會引起胃蛋白酶分泌的減少。

測定原理：

胃蛋白酶可催化血紅蛋白水解，水解產(chǎn)物與福林試劑反應后顯藍色；一定范圍內(nèi)，其顏色的深淺與胃蛋白酶活性呈正比。

自備儀器和用品：

可見分光光度計、臺式離心機、水浴鍋、可調式移液器、1mL 玻璃比色皿、研缽、冰和蒸餾水。

試劑組成和配制：

試劑一：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 50mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1 瓶， 4℃避光保存。臨用前加入 25 mL 試劑二充分溶解。

試劑四：粉劑×1 瓶， 4℃保存。臨用前加入 25 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1 瓶， 4℃保存。臨用前加入 30 mL 蒸餾水充分溶解。

試劑六：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

標準品：液體 1.26mL×1 支，0.5 μ mol/mL 酪氨酸標準溶液濃度 4℃保存。

粗酶液提取：

組織樣品：按照組織質量（g）：試劑一體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g 組織， 加入 1mL 試劑一）冰浴勻漿，8000g ，4℃離心 10min ，取上清，即粗酶液。

測定步驟：

1、分光光度計預熱 30min，調節(jié)波長到 580 nm，蒸餾水調零。

2、試劑三和試劑四置于 37℃水浴預熱 30min。

3、標準管：取玻璃比色皿，加入 100μL 標準品，200μL 試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm測光吸收，記為 A 標準管。

4、空白管：取玻璃比色皿，加入 100μL 蒸餾水，200μL 試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min，于 580 nm測光吸收，記為 A 空白管。

5、對照管：取 EP 管，加入 500 μL 蒸餾水，置于 37℃水浴保溫 10min；加入 500μL 試劑四， 蓋緊后搖勻 1min；加入 100μL 粗酶液，混勻后 8000g 4℃離心 10 分鐘取上清；在玻璃比色 皿中加入上清液 100μL ，再加入 200μL 試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫 靜置 20min，于 580 nm測光吸收，記為 A 對照管。

6、測定管：取 EP 管，加入 100μL 粗酶液，500  μL 試劑三，置于 37℃水浴保溫 10min；加 入 500μL 試劑四，蓋緊后搖勻 1min；8000g  4℃離心 10 分鐘取上清；在玻璃比色皿中加入 上清液 100μL，再加入 200μL 試劑二，600μL 試劑五，100μL 試劑六，混勻后室溫靜置 20min， 于 580 nm測光吸收，記為 A 測定管。

注意：空白管和標準管只需要測定一次。

計算公式：

1、按照蛋白濃度計算

活性單位定義：37℃每毫克蛋白每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪氨酸為 1 個酶活單位。

胃蛋白酶活性（nmol/min/mg prot）=C 標準品×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空白管）×V1×稀釋倍數(shù)÷（Cpr×V1）÷T

=550×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空白 管）÷Cpr

2、按照樣本質量計算

活性單位定義：37℃每克組織每分鐘催化血紅蛋白水解生成 1nmol 酪氨酸為 1 個酶活單位。 

胃蛋白酶活性（nmol/min/g 鮮重）=C 標準品×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空白管）×V1×稀釋倍數(shù)÷（W×V1÷V2）÷T

=550×（A 測定管－A 對照管）÷（A 標準管－A 空 白管）÷W

C 標準品：標準品濃度，0.5 μ mol/mL 酪氨酸；稀釋倍數(shù)：（100+500+500）÷100=11 ；Cpr： 粗酶液蛋白質濃度（mg/mL），需要另外測定；W：組織質量（g）；V1：加入反應體系中上 清液體積（mL），100μL= 0.1 mL；V2：粗酶液總體積（mL），1mL；T：催化反應時間（min），10min。

注意事項

試劑三、試劑四、試劑五臨用前配制，配制好用不完的試劑 4℃可保存一周。