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乳酸（LA）含量檢測試劑盒說明書（分光光度法）

貨號：LE-1-228

正式測定之前選擇 2-3 個預期差異大的樣本做預測定。

測定意義

乳酸是生物體代謝過程中重要的中間產(chǎn)物，與糖代謝、脂類代謝、蛋白質(zhì)代謝及細胞內(nèi)能量 代謝密切相關(guān)，乳酸含量是評估糖元代謝的和有氧代謝的重要指標。

測定原理

乳酸在乳酸脫氫酶的作用下生成丙酮酸，同時使 NAD⁺ 還原生成 NADH 和 H⁺，H⁺傳遞給 PMS 生成的 PMSH₂ 還原 INT 生成紅色物質(zhì)，在530nm 處有特征吸收峰。

自備實驗用品及儀器

天平、研缽、離心機、可見分光光度計、 1 mL 玻璃比色皿、恒溫水浴鍋。

試劑組成和配制

提取液：液體 55mL×1 瓶，4℃保存。

試劑一：液體 5mL×1 瓶，4℃保存。

試劑二：液體 12mL×1 瓶，4℃保存。

試劑三：粉劑×1支，-20℃避光保存。臨用前加入 1.5mL 蒸餾水充分溶解。

試劑四：粉劑×1瓶，4℃避光保存。臨用前加 15mL 蒸餾水充分溶解。

試劑五：粉劑×1支，4℃避光保存。

標準品：液體 1mL×1 支 ，4℃保存。

顯色液：臨用前根據(jù)用量按照提取液（V）：試劑三（V）：試劑四（V）：試劑五（m）=1（mL)： 0.3（mL)：3（mL)： 15（mg）的比例充分混勻。

注意：現(xiàn)配現(xiàn)用，用多少配多少，在棕色瓶中配制，試劑盒中帶有 5 個棕色空瓶。

樣本處理

1、組織：按照質(zhì)量（g）：提取液體積(mL)為 1 ：5~10 的比例（建議稱取約 0.1g，加入 1mL 提取液）加入提取液，冰浴勻漿后于4℃,  12000g 離心 10min，取上清測定。

2、細胞： 按照細胞數(shù)量（10⁴ 個）： 提取液體積（mL）為 500~1000： 1  的比例（建議  500 萬細胞加入 1mL 提取液）， 冰浴超聲波破碎細胞（功率 300w，超聲 3 秒，間隔 7 秒， 總時間 3min）； 于 4℃,  12000g 離心 10min，取上清測定。

3、血清： 直接測定。

測定操作

注意：標準對照管和標準測定管只需測定一次，每個樣品測定管設(shè)一個樣品對照管。

計算公式：

1、按照蛋白含量計算

LA 含量(μmol/mg prot）=△A 樣÷△A 標×C 標÷ Cpr 

=2×△A 樣÷△A 標÷ Cpr

2、按照樣本質(zhì)量計算

LA 含量(μmol/g  鮮重）=△A 樣÷△A 標×C 標÷ W 

=2×△A 樣÷△A 標÷ W

3、按照細胞數(shù)量計算

LA 含量(μmol/10⁴ cell）=△A 樣÷△A 標×C 標÷ 細胞數(shù)量 

=2×△A 樣÷△A 標÷ 細胞數(shù)量

4、按照液體體積計算

LA 含量(μmol/mL）=△A 樣÷△A 標×C 標 

=2×△A 樣÷△A 標

C 標：標準品濃度，2mmol/L ；W：樣本質(zhì)量，g/mL；Cpr：樣本蛋白質(zhì)濃度，mg/mL

注意事項

1、若吸光值超過 2，請進行適當?shù)南♂尯笤龠M行測定，并在計算公式中乘以稀釋倍數(shù)。

2、最低檢出限為 1.8μmol/L。