產(chǎn)品名稱:BCA蛋白法含量測(cè)試盒
產(chǎn)品規(guī)格:50管/48樣,100管/96樣
產(chǎn)品貨號(hào):LE-1-371,LE-2-371
免費(fèi)咨詢:0551-66107970
貨號(hào) |
產(chǎn)品名稱 |
檢測(cè)方法 |
規(guī)格 |
售價(jià)(元) |
LE-1-371 |
BCA蛋白法含量測(cè)試盒 |
分光光度法 |
50管/48樣 |
100 |
LE-2-371 |
BCA蛋白法含量測(cè)試盒 |
微量法 |
100管/96樣 |
190 |
BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒說明書(分光光度法)
貨號(hào):LE-1-371
正式測(cè)定之前選擇 2-3 個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定確保蛋白濃度在 20-2000μg/ml 內(nèi)。
測(cè)定意義
樣品可溶性蛋白質(zhì)含量常常用于酶活性計(jì)算。此外,可溶性蛋白質(zhì)含量也用于食品等質(zhì)量分析。
測(cè)定原理
堿性條件下,蛋白質(zhì)中半胱氨酸、胱氨酸、色氨酸、酪氨酸以及肽鍵,能將 Cu2+還原成 Cu+; 2 分子的 BCA 與 Cu+結(jié)合,生成紫色絡(luò)合物,在 40-595nm 有吸收峰,562nm 處吸收峰最強(qiáng)。
自備儀器和用品
臺(tái)式離心機(jī)、恒溫水浴鍋、可見分光光度計(jì)、移液器、1mL 玻璃比色皿和蒸餾水。
試劑組成和配制
試劑 A:液體 50mL×1 瓶,4℃保存。
試劑 B:液體 1mL×1 支,4℃保存。
標(biāo)準(zhǔn)蛋白:0.5mg/ml液體×1 支,4℃保存。
工作液配制:臨用前請(qǐng)根據(jù)擬用工作液體積(樣本數(shù)×1mL),將試劑 A 和 B 按照 50:1 的比例混合,蓋緊后充分混勻。
樣品中可溶性蛋白質(zhì)提取
1、液體樣品:澄清無(wú)色液體樣品可以直接測(cè)定。
2、組織樣品:按照組織質(zhì)量(g):提取液體積(mL)為 1:5~10 的比例(建議稱取約 0.1g 組織,加入 1mL 提取液(自備,根據(jù)需要選用酶提取緩沖液或者蒸餾水或者生理鹽水)冰浴勻漿,8000g,4℃離心 10min,取上清,即待測(cè)液。(動(dòng)物樣品常常需要稀釋)
3、細(xì)菌、真菌:按照細(xì)胞數(shù)量(104 個(gè)):提取液體積(mL)為 500~1000:1 的比例(建議 500 萬(wàn)細(xì)胞加入 1mL 提取液),冰浴超聲波破碎細(xì)胞(功率 300w,超聲 3 秒,間隔 7 秒,總時(shí)間 3min);然后 8000g,4℃,離心 10min,取上清置于冰上待測(cè)。
測(cè)定操作
1、分光光度計(jì)預(yù)熱 30min,調(diào)節(jié)波長(zhǎng)到 562nm,蒸餾水調(diào)零。
2、工作液置于 60℃水浴預(yù)熱 30min。
空白管
標(biāo)準(zhǔn)管
測(cè)定管
蒸餾水(μL)
20
標(biāo)準(zhǔn)品(μL)
20
待測(cè)液(μL)
20
工作液(μL)
1000
1000
1000
混勻后置于 60℃保溫 30min,于 1mL 比色皿在 562nm 處測(cè)定吸光值 A,分別記為 A 空白管、A 標(biāo)準(zhǔn)管、A 測(cè)定。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需要做一次。
計(jì)算公式
Cpr (mg/mL)= C 標(biāo)準(zhǔn)品×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
=0.5×(A 測(cè)定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
注意事項(xiàng)
1、BCA 法蛋白含量測(cè)定試劑盒,適用于測(cè)定蛋白濃度在 20-2000μg/ml 樣品。測(cè)定前取 1-2 個(gè)樣做預(yù)實(shí)驗(yàn),樣品蛋白含量太高的話,請(qǐng)稀釋至相應(yīng)濃度范圍內(nèi),以確保測(cè)定的準(zhǔn)確性。
2、待測(cè)樣品蛋白提取可用生理鹽水、蒸餾水或 PBS 提??;
3、由于受測(cè)定溫度及時(shí)間等的影響,建議嚴(yán)格按照給定條件測(cè)定,即 60℃水浴保溫 30min。
相關(guān)新聞: |
0551-66107970
地址:安徽省合肥市蜀山區(qū)經(jīng)濟(jì)開發(fā)區(qū)湖光路自主創(chuàng)新產(chǎn)業(yè)基地三期(南區(qū))B座版權(quán)所有 © 合肥萊爾生物科技有限公司 皖I(lǐng)CP備17006278號(hào)-2